去鐵胺和阿加曲班減輕非張力性血腫對(duì)擴(kuò)張皮瓣影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究背景與目的：皮膚軟組織擴(kuò)張術(shù)已廣泛應(yīng)用于臨床，成為整形外科常規(guī)治療手段之一，用于多種組織缺損的修復(fù)和器官再造。但是在擴(kuò)張器植入術(shù)后經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)一些并發(fā)癥，如血腫、感染、皮瓣壞死等，其中血腫是最常見(jiàn)的。血腫不僅會(huì)對(duì)皮瓣產(chǎn)生壓迫使組織缺血，而且會(huì)對(duì)組織產(chǎn)生毒性作用。此外，血腫又與感染和皮瓣壞死密切相關(guān)。目前，臨床上對(duì)于擴(kuò)張器植入術(shù)后血腫的治療僅限于清除血腫，尚無(wú)有效的減輕皮瓣損傷的治療藥物。本研究的目的是探討非張力性血腫引起擴(kuò)張器表面皮瓣

2、損傷的機(jī)制，為減輕血腫造成的皮瓣損傷尋求有效的治療藥物，并探討其作用機(jī)理。本研究由兩部分組成： 第一部分 去鐵胺減輕非張力性血腫中鐵對(duì)未擴(kuò)張皮瓣毒性作用的研究方法：13頭4-8月齡白色小型豬，在每頭豬脊柱兩側(cè)各設(shè)計(jì)5個(gè)術(shù)區(qū)，共128個(gè)術(shù)區(qū)，共植入128個(gè)80ml腎形擴(kuò)張器，形成128個(gè)未擴(kuò)張皮瓣。將未擴(kuò)張皮瓣隨機(jī)分配進(jìn)入對(duì)照組、血腫組、去鐵胺組、阿加曲班組，每組32個(gè)未擴(kuò)張皮瓣。其中關(guān)于阿加曲班組的實(shí)驗(yàn)內(nèi)容將在論文第二部

3、分的實(shí)驗(yàn)二中敘述。對(duì)照組：擴(kuò)張器植入后不做其他處理；血腫組：在擴(kuò)張器植入后向剝離腔隙內(nèi)注入15ml自體血液；去鐵胺組：在擴(kuò)張器植入后向剝離腔隙內(nèi)注入15ml自體血液和270mg甲磺酸去鐵胺。各組分別在術(shù)后24h、72h、120h取材，每組共取材24個(gè)未擴(kuò)張皮瓣。每組取材后剩余的8個(gè)擴(kuò)張器于術(shù)后8天注水，注水完畢后取材。檢測(cè)各組擴(kuò)張器植入術(shù)后2h皮瓣的血流情況，檢測(cè)未擴(kuò)張皮瓣鐵含量、丙二醛(MDA)含量、髓過(guò)氧化物酶(MPO)活性、擴(kuò)張皮

4、瓣包膜厚度、包膜膠原含量和擴(kuò)張皮瓣即時(shí)回縮率。 結(jié)果：(1)三個(gè)組擴(kuò)張器植入術(shù)后2h未擴(kuò)張皮瓣血流灌注量無(wú)顯著差別(P>0.05)； (2)血腫組術(shù)后皮瓣鐵含量、MDA含量和MPO活性均高于對(duì)照組(P<0.01)；去鐵胺組皮瓣鐵含量和MDA含量低于血腫組(P<0.01)，MPO活性與血腫組無(wú)顯著差異(P>0.05)； (3)血腫組擴(kuò)張皮瓣包膜厚度、包膜膠原含量和擴(kuò)張皮瓣即時(shí)回縮率均高于對(duì)照組(P<0.01)，去鐵胺組與血腫組無(wú)顯

5、著差異(P>0.05)。 第二部分 阿加曲班減輕非張力性血腫中凝血酶對(duì)擴(kuò)張皮瓣的影響及其機(jī)制的研究實(shí)驗(yàn)一凝血酶對(duì)豬皮膚成纖維細(xì)胞增殖作用的研究方法：采用貼壁法進(jìn)行豬皮膚成纖維細(xì)胞原代培養(yǎng)，并傳代、鑒定。用MTT法檢測(cè)不同濃度凝血酶刺激后的成纖維細(xì)胞活力。用氯胺T法檢測(cè)不同濃度凝血酶刺激后的細(xì)胞上清中羥脯氨酸含量。用免疫組化的方法檢測(cè)凝血酶刺激后的成纖維細(xì)胞中α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)的表達(dá)情況。在培養(yǎng)液中加入阿加曲

6、班后重復(fù)上述檢測(cè)。 結(jié)果：(1)培養(yǎng)的細(xì)胞為典型的成纖維細(xì)胞形態(tài)，波形蛋白單克隆抗體免疫組化染色呈陽(yáng)性。(2)加入不同濃度凝血酶的各組吸光值均高于不加凝血酶組(A組)(P<0.01)，加入阿加曲班和凝血酶的各組吸光值與A組無(wú)顯著性差異(P>0.05)。(3)加入不同濃度凝血酶的各組細(xì)胞上清中羥脯氨酸含量均高于不加凝血酶組(A組)(P<0.01)，加入阿加曲班和凝血酶的各組上清中羥脯氨酸含量與A組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。

7、(4)凝血酶刺激后的成纖維細(xì)胞中有α-SMA的表達(dá)，加入阿加曲班后此種表達(dá)被抑制。 實(shí)驗(yàn)二阿加曲班減輕非張力性血腫中凝血酶對(duì)擴(kuò)張皮瓣影響的研究方法：本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)照組、血腫組和阿加曲班組。其中對(duì)照組和血腫組的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與第一部分中的對(duì)照組和血腫組相同。阿加曲班組：在擴(kuò)張器植入后向剝離腔隙內(nèi)注入15ml血液和5001μg阿加曲班。各組分別在術(shù)后24h、72h、120h取材，每組取材后剩余的8個(gè)擴(kuò)張器于術(shù)后8天注水，注水完畢后取材。檢測(cè)

8、未擴(kuò)張皮瓣MPO活性、MDA含量、擴(kuò)張皮瓣包膜厚度、包膜膠原含量和擴(kuò)張皮瓣即時(shí)回縮率。用免疫組化的方法檢測(cè)未擴(kuò)張皮瓣中細(xì)胞間粘附分子-1(ICAM-1)和擴(kuò)張皮瓣中α-SMA的表達(dá)情況。 結(jié)果：(1)血腫組術(shù)后皮瓣MPO活性和ICAM-1的表達(dá)量均高于對(duì)照組(P<0.01)，阿加曲班組皮瓣MPO活性和ICAM-1的表達(dá)量均低于血腫組(P<0.01)：(2)血腫組術(shù)后72h和120h皮瓣MDA含量均高于對(duì)照組(P<0.01)，阿加

9、曲班組術(shù)后72h和120h皮瓣MDA含量低于血腫組(P<0.05)(3)血腫組擴(kuò)張皮瓣包膜厚度、包膜膠原含量、擴(kuò)張皮瓣中a-SMA的表達(dá)量、擴(kuò)張皮瓣即時(shí)回縮率均高于對(duì)照組(P<0.05)，阿加曲班組的這些指標(biāo)均低于血腫組(P<0.05)。 結(jié)論： 1.擴(kuò)張器植入術(shù)后形成的非張力性血腫能使未擴(kuò)張皮瓣脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)和炎癥反應(yīng)增強(qiáng)。局部應(yīng)用去鐵胺能減輕血腫造成的脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，去鐵胺的這種作用主要是通過(guò)降低皮瓣中的鐵含量而實(shí)現(xiàn)

10、的。局部應(yīng)用阿加曲班能減輕血腫造成的脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)和炎癥反應(yīng)，阿加曲班的這種作用是通過(guò)抑制血腫中的凝血酶而實(shí)現(xiàn)的。 2.凝血酶能誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞增殖、膠原分泌量增加，能刺激成纖維細(xì)胞表達(dá)α-SMA，使成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)榧〕衫w維細(xì)胞。阿加曲班能抑制凝血酶的這種作用。 3.非張力性血腫能使擴(kuò)張皮瓣的纖維包膜增厚、包膜膠原含量增加、α-SMA表達(dá)增多、擴(kuò)張皮瓣即時(shí)回縮率增加。局部應(yīng)用去鐵胺不能減輕血腫的這種作用。局部應(yīng)用阿加曲班能