丹皮酚對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎的治療效果及機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　潰瘍性結(jié)腸炎是一類臨床常見疾病，目前缺乏較好的治療方法，本研究在臨床實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)了丹皮酚(Pae)注射液治療潰瘍性結(jié)腸炎的療效顯著。本文觀察其臨床效果，并對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行研究，為潰瘍性結(jié)腸炎的臨床治療提供可參考的新方向。
　　方法:
　　采用臨床實(shí)驗(yàn)結(jié)合動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，通過丹皮酚注射液對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎患者的臨床治療，觀察其臨床治療效果;通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，探究其可能存在的作用機(jī)理。全文實(shí)驗(yàn)共分為五部分:(1)丹皮酚對(duì)潰瘍性

2、結(jié)腸炎的臨床療效觀察。選取2015年1月-2016年9月鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院消化內(nèi)科收治的80例潰瘍性結(jié)腸炎患者作為研究對(duì)象，分為對(duì)照組(40例)和治療組(40例)。對(duì)照組采用常規(guī)藥物（美沙拉嗪或潑尼松片）治療;治療組在常規(guī)藥物治療的基礎(chǔ)上給予肌內(nèi)注射丹皮酚注射液。治療周期14天，觀察指標(biāo)包括血小板水平、血紅蛋白水平、白蛋白水平、C反應(yīng)蛋白水平、紅細(xì)胞沉降速率、機(jī)體氧化應(yīng)激水平、炎性因子含量變化情況及ICAM-1、MMP-9蛋白表達(dá)水平

3、，評(píng)價(jià)療效;(2)丹皮酚對(duì)葡聚糖硫酸鈉(DSS)誘導(dǎo)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型的保護(hù)作用。利用DSS誘導(dǎo)制備潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型，隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、丹皮酚（低、高）劑量組及陽性對(duì)照組，觀察大鼠一般狀態(tài)、體重變化情況及疾病活動(dòng)指數(shù)(DAI)，ELISA法檢測(cè)血清炎性因子水平，血漿MDA和SOD水平，RT-PCR法檢測(cè)結(jié)腸組織炎性因子mRNA表達(dá)水平，Western Blot法檢測(cè)結(jié)腸粘膜組織ICAM-1、MMP-9蛋白表達(dá)水平，并評(píng)價(jià)組織

4、損傷程度;(3)丹皮酚對(duì)DSS誘導(dǎo)所致腸炎的抗炎效果及機(jī)制研究。利用DSS誘導(dǎo)制備潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型，隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、丹皮酚(低、中、高劑量）組及陽性對(duì)照組，ELISA法測(cè)定大鼠血清炎性因子水平，RT-PCR法測(cè)定大鼠血清炎性因子mRNA表達(dá)水平，Western Blot法測(cè)定NF-κB和MAPK信號(hào)通路蛋白表達(dá)水平;(4)丹皮酚對(duì)大鼠CD4+T細(xì)胞亞群及其相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)的影響及機(jī)制研究。利用DSS誘導(dǎo)制備潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模

5、型，隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、丹皮酚治療組，流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD4+T細(xì)胞亞群Th1、Th2、Th17和Treg細(xì)胞的比例，RT-PCR法檢測(cè)CD4+T細(xì)胞各亞型轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)，抗體芯片檢測(cè)CD4+T各細(xì)胞因子的表達(dá)，免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)大鼠結(jié)腸粘膜組織Th1、Th2、Th17和Treg細(xì)胞的表達(dá)，Western Blot法測(cè)定IL-23R/Jak2/Stat3信號(hào)通路蛋白表達(dá)水平;(5)丹皮酚對(duì)模型大鼠腸黏膜相關(guān)生長(zhǎng)因子的影響。利用

6、DSS誘導(dǎo)制備潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型，隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、丹皮酚（低、高劑量）組及陽性對(duì)照組，SABC免疫組化染色法觀察大鼠腸黏膜平均血管密度，MASSON染色法觀察腸黏膜血管微血栓形成，ELISA法檢測(cè)血漿及結(jié)腸黏膜血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)、血小板衍生因子(PDGF)水平，放射免疫分析法測(cè)定血漿及結(jié)腸一氧化氮(NO)水平，Western Blot法測(cè)定血漿及結(jié)腸缺氧誘導(dǎo)因子(HIF-1)水平。

7、r>　　結(jié)果:
　　(1)丹皮酚可有效改善患者的臨床癥狀，改善腸黏膜病變，消除并發(fā)癥，降低血小板、C反應(yīng)蛋白濃度，降低紅細(xì)胞沉降速率，降低ICAM-1、MMP-9蛋白表達(dá)水平，提高血紅蛋白、白蛋白水平，同時(shí)不會(huì)引起嚴(yán)重的不良反應(yīng);(2)丹皮酚注射液可有效抑制大鼠體重下降趨勢(shì)，改善模型大鼠DAI指數(shù)，降低體內(nèi)IL-1、IL-4、INF-γ、TNF-α及氧化應(yīng)激水平，提高IL-10水平，同時(shí)對(duì)炎性因子mRNA表達(dá)具有調(diào)節(jié)作用，降低IC

8、AM-1、MMP-9蛋白的表達(dá)，改善大鼠腸黏膜平均血管密度，抑制微血栓形成;(3)丹皮酚可以顯著抑制DSS誘導(dǎo)的實(shí)驗(yàn)性腸炎大鼠促炎癥因子IL-1β、IL-4、IL-6、IFN-γ、TNF-α和MCP-1及其mRNA的表達(dá)，免疫印跡結(jié)果顯示，丹皮酚可抑制NF-κB通路p-IκB、p-p65、p-IKKα/β水平和MAPK通路中p-Erk1/2、p-JNK、p-p38水平，從而抑制NF-κB通路和MAPK通路活性;(4)丹皮酚可提高CD4+

9、T細(xì)胞亞型Treg細(xì)胞的比例，下調(diào)Th1、Th2和Th17細(xì)胞的比例，提高FoxP3的表達(dá)水平，下調(diào)GATA-3、RORc及T-bet表達(dá)水平，降低細(xì)胞因子IL-2、IL-4、IL-21和IL-17表達(dá)水平。抑制IL-23R和JAK-2蛋白的表達(dá)，并抑制stat3磷酸化，促進(jìn)smad磷酸化，由此抑制IL-23R/Jak2/Stat3信號(hào)通路活性;(5)丹皮酚注射液可有效改善模型大鼠腸黏膜平均血管密度及腸黏膜血管微血栓形成個(gè)數(shù)，降低血漿及

10、結(jié)腸組織VEGF、NO、bFGF及HIF-1水平。
　　結(jié)論:
　　(1)丹皮酚注射液對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎具有較好的治療效果，治療機(jī)制可能與減低體內(nèi)氧化應(yīng)激、炎性因子水平及血管細(xì)胞因子的表達(dá)有關(guān);(2)丹皮酚對(duì)模型大鼠的保護(hù)作用可能是通過降低氧化應(yīng)激水平及炎性因子mRNA的表達(dá)，消除炎癥反應(yīng)，抑制ICAM-1、MMP-9蛋白的表達(dá)，改善腸道及血管功能，從而起到對(duì)模型大鼠的保護(hù)作用;(3)丹皮酚可降低腸炎模型大鼠炎性水平，其作用機(jī)制