半夏總生物堿對帕金森病的防治作用及機制研究.pdf

1、帕金森病(Parkinson's disease,PD)是發(fā)生于中老年人的黑質(zhì)和紋狀體通路變性的疾病,是僅次于阿爾茨海默病(Alzheimer's disease,AD)的第二大常見神經(jīng)退行性疾病。流行病調(diào)查顯示,全世界大約有六百萬人患有此病,但目前臨床上對于PD的病因和發(fā)病機制尚不完全清楚,對于它的治療仍舊是一個世界性的難題。近年來,在PD的發(fā)病機制研究方面取得了很多進展,主要集中在遺傳因素、環(huán)境因素、免疫/炎性機制、氧化應激和細胞凋

2、亡等方面,特別是氧化應激在PD中的作用越來越受到研究者的重視。研究表明,隨著年齡的增長,大腦中蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、核酸的氧化代謝加快,PD發(fā)病者中氧化過程更快,如何對抗神經(jīng)系統(tǒng)的氧化應激來抑制神經(jīng)元的凋亡已逐漸成為研究熱點。
　　 半夏為天南星科植物半夏(Pinellia ternate(Thunb Breit)的干燥塊莖,是一種常見中藥,具有燥濕化痰,降逆止嘔,消痞散結之功效。半夏含有生物堿、有機酸、多糖、蛋白等多種成分,其中生物堿

3、為半夏的主要有效成分之一,有研究表明,半夏對中樞神經(jīng)系統(tǒng)有一定的抗氧化作用。本實驗通過6-羥基多巴胺(6-OHDA)誘導神經(jīng)元細胞損傷分別來建立PD動物模型以及PD細胞模型,就半夏總生物堿是否對6-OHDA誘導的神經(jīng)元細胞的損傷具有保護作用進行研究探討。
　　 第一部分 半夏總生物堿對PD大鼠學習記憶能力的影響及機制研究
　　 目的:探討半夏總生物堿(Total Alkaloids from Pinellia Terna

4、te,TAPT)對帕金森病大鼠的防治作用,及其機制方面的研究。
　　 方法:將雄性Wistar大鼠分為正常對照組、PD模型組、陽性組、TAPT治療組(低劑量組、中劑量組、高劑量組),每組10只,PD造模成功后,給予TAPT治療組各組按0.1 ml/kg進行灌胃,濃度分別是25、50、100μg/ml,每天1次,連續(xù)60天,同時正常對照組灌胃給予等量生理鹽水作為對照,陽性組給予美多巴20 mg/(kg·d)。采用Morris水迷宮

5、進行帕金森病大鼠的行為學檢測,用化學比色法檢測大腦皮質(zhì)及血清超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)、過氧化氫(H2O2)和還原型谷胱甘肽(GSH)的含量。
　　 結果:與正常對照組比較,PD模型組大鼠的逃避潛伏期明顯延長(P＜0.01),跨越平臺次數(shù)明顯減少(P＜0.01);TAPT治療組,大鼠逃避潛伏期明顯縮短(P＜0.05,P＜0.01),跨越平臺次數(shù)明顯增加(P＜0.01)。PD模型組大鼠腦皮質(zhì)及血清中MDA、H2

6、O2的含量增加,SOD活性及GSH的含量降低(P＜0.01):與PD模型組相比,TAPT各組腦皮質(zhì)MDA、H2O2的含量顯著減少(P＜0.01),腦皮質(zhì)SOD活性,GSH含量顯著增加(P＜0.01);TAPT低濃度組、中濃度組血清MDA含量無統(tǒng)計學意義(P＞0.05),高濃度組血清MDA含量下降(P＜0.01),各治療組中血清H2O2含量明顯下降(P＜0.01),血清SOD活性,GSH含量顯著增加(P＜0.01)。
　　 結論:

7、半夏總生物堿具有改善學習記憶能力,對大鼠神經(jīng)系統(tǒng)的退行性變有防護作用,這可能與提高帕金森模型大鼠大腦皮質(zhì)及血清SOD活性、GSH的含量,抑制了MDA和H2O2的產(chǎn)生有關。
　　 第二部分 半夏總生物堿對6-OHDA誘導的PC12細胞損傷模型的保護機制
　　 目的:探討TAPT對6-OHDA誘導的大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(PC12細胞)損傷的保護作用及其可能機制。
　　 方法:PC12細胞接種于培養(yǎng)瓶中進行培養(yǎng),培

8、養(yǎng)液為含15％小牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基,置于37℃,5%CO2條件下培養(yǎng)箱中培養(yǎng),隔天換液,待單層培養(yǎng)細胞80%匯合后,用0.25%胰蛋白酶消化,傳代培養(yǎng),取對數(shù)生長期細胞進行實驗。實驗分為5組:①正常對照組(DMEM高糖培養(yǎng)基);②模型組(6-OHDA100μmol/L);⑧TAPT低、中、高劑量組(TL、TM、TH組)。TAPT的終濃度分別為25、50、100μg/ml,不同濃度的TAPT作用1h后,加入終濃度為100μmol/

9、L的6-OHDA繼續(xù)培養(yǎng)24 h。采用MTT法檢測各組PC12細胞活力,比色法測定caspase-3活性;黃嘌呤氧化酶法檢測細胞總超氧化物歧化酶(T-SOD)活性,硫代巴比妥法檢測丙二醛(MDA)的含量、Fenton反應原理檢測抑制羥自由基(·OH)的能力;流式細胞儀(FCM)測定PC12細胞凋亡百分比;采用免疫印跡法(Western Blot)檢測Bcl-2和Bax的蛋白表達水平。
　　 結果:濃度為100μmol/L的6-O

10、HDA作用PC12細胞24 h后,與正常對照組相比,細胞活力明顯降低(P＜0.05),T-SOD活性和抑制·OH的能力明顯下降(P＜0.05),而MDA含量和Caspase-3活性明顯升高(P＜0.05);與模型組相比,經(jīng)過TAPT處理組的PC12細胞活力逐漸升高(P＜0.05),T-SOD活性和抑制·OH的能力明顯上升(P＜0.05),而MDA含量和Caspase-3活性明顯降低(P＜0.05)。與正常對照組比較,模型組Bax蛋白表達