調(diào)節(jié)性T細胞在沙眼衣原體小鼠肺炎易感性差異免疫學機制的研究.pdf

1、目的：
　　 用沙眼衣原體小鼠肺炎菌株(Chlamydia muridarum，Cm)呼吸道感染易感性不同的小鼠C57BL/6(C57)和C3H/HeN(C3H)，建立小鼠衣原體感染肺炎模型。通過檢測衣原體在感染小鼠肺組織的生長，小鼠機體對衣原體的清除，宿主Th1細胞免疫應答的模式確定兩種小鼠易感性差異。通過檢測感染不同時期兩種小鼠體內(nèi)調(diào)節(jié)性T細胞(regulatory T cells，Treg cells)應答水平及與Treg

2、細胞作用及浸潤相關的細胞因子白細胞介素-10(Interleukin-10，IL-10)及白細胞介素-2(Interleukin-2，IL-2)在肺組織中的表達，探討Treg細胞在Cm呼吸道感染易感性差異中的免疫學作用機制。
　　 方法：
　　 取6-8周齡的C57小鼠和C3H小鼠，鼻腔吸入40ul含1×103IFU的Cm，建立沙眼衣原體小鼠肺感染模型。監(jiān)測感染后不同時期小鼠體重變化及死亡率，檢測肺組織衣原體包涵體形成單

3、位(IFU)及肺組織病理改變，確定衣原體在肺組織中的生長及肺組織炎癥；采用ELISA技術(shù)和細胞內(nèi)細胞因子染色技術(shù)檢測Th1細胞因子IFN-γ的分泌；利用流式細胞術(shù)檢測Cm感染后體內(nèi)CD4+CD25+T細胞、Foxp3+CD4+CD25+T細胞百分率，比較Cm呼吸道感染不同時期C57小鼠和C3H小鼠調(diào)節(jié)性T細胞的免疫應答水平差異；利用RT-PCR技術(shù)檢測C57小鼠和C3H小鼠肺組織調(diào)節(jié)性T細胞相關細胞因子IL-10 mRNA、IL-2 m

4、RNA表達差異。
　　 結(jié)果：
　　 用1×103IFU Cm經(jīng)鼻腔吸入感染誘導了小鼠沙眼衣原體肺炎，以小鼠體重下降、肺組織衣原體繁殖及大量炎癥細胞浸潤為特征。與C57小鼠比較，C3H小鼠感染后存在嚴重的體重降低、較高的死亡率、較長的疾病過程和嚴重的肺組織病理變化。ELISA結(jié)果發(fā)現(xiàn)，雖然兩組小鼠感染Cm后IFN-γ分泌水平相似，但細胞內(nèi)細胞因子染色結(jié)果顯示，Cm感染后第14天，C57小鼠CD8+T細胞IFN-γ產(chǎn)生水平

5、顯著高于C3H小鼠，提示C3H小鼠存在較弱的衣原體特異性的Th1反應。與正常對照組小鼠比較，Cm感染在兩組小鼠均誘導較高水平的CD4+CD25+T細胞、Foxp3+CD4+CD25+T細胞產(chǎn)生及IL-2 mRNA表達。感染后第3及第7天，高易感性的C3H小鼠肺組織細胞因子IL-2表達及CD4+CD25+T細胞、Foxp3+CD4+CD25+T細胞擴增水平均高于C57小鼠。RT-PCR結(jié)果顯示，Cm感染14天C3H小鼠Treg相關細胞因子