利用防衛(wèi)應(yīng)答順式元件克隆水稻中相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子.pdf

1、作為固著生物,植物體在其生活史中常常要遭遇生物和非生物等環(huán)境的脅迫.然而,為了適應(yīng)環(huán)境條件的變化,植物體在長(zhǎng)期的進(jìn)化過(guò)程中均會(huì)形成一套完善的保護(hù)體系.這些保護(hù)措施包括一些列組成性和誘導(dǎo)性生物化學(xué)過(guò)程.植物對(duì)環(huán)境脅迫的抵御可能有多條途徑,對(duì)不同的環(huán)境脅迫因子的調(diào)節(jié)也可能通過(guò)相同的途徑.追溯到分子水平分析,植物在受到環(huán)境脅迫的條件下,很多基因的轉(zhuǎn)錄水平受控于其中的順式和反式因子.這些與環(huán)境脅迫緊密相關(guān)的基因通過(guò)不同的時(shí)間和空間表達(dá)實(shí)現(xiàn)對(duì)環(huán)境

2、的應(yīng)答.參與環(huán)境脅迫的基因啟動(dòng)子部分的順式作用元件得到廣泛的研究,很多種類的順式作用元件參與環(huán)境脅迫因子的應(yīng)答.為了進(jìn)一步了解植物對(duì)不良環(huán)境的抗性機(jī)制,必須克隆與這些順式作用元件相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子.酵母單雜交體系是克隆與順式作用元件相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子或其結(jié)合蛋白行之有效的方法.該研究首先通過(guò)酵母單雜交體系分離與w盒類似的順式元件相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子.這個(gè)順式元件存在于玉米病程相關(guān)蛋白基因PRm啟動(dòng)子中.w盒存在很多病原菌誘導(dǎo)的基因啟動(dòng)子中,是參與病原

3、菌應(yīng)答的一類主要順式作用元件.利用酵母單雜交體系,我們從水稻的cDNA庫(kù)中分離到16個(gè)陽(yáng)性克隆.通過(guò)序列測(cè)定和比較確定有3個(gè)克隆來(lái)源于同一個(gè)基因.該基因定名為RWRKY,它編碼一個(gè)264個(gè)氨基酸組成的蛋白質(zhì),其中含有典型的WRKY結(jié)構(gòu)和可能的核定位序列信號(hào).通過(guò)與其他的蛋白質(zhì)進(jìn)行BLAST分析,證實(shí)該基因?yàn)閃RKY家族中的新成員,電子雜交表明該基因存在基因組第9號(hào)染色體上,只含有1個(gè)拷貝.利用水楊酸處理幼苗,RWRKY能夠誘導(dǎo)表達(dá),但是