喜樹CMCs和DDCs體系對香豆素類成分的生物轉化.pdf

1、喜樹(Camptotheca acuminate Decne.)是藍果樹科(Nyssaceae)喜樹屬(Camptotheca)植物。本實驗室以喜樹的幼莖和嫩葉作為外植體分別誘導出形成層分生組織(Cambial meristematic cells，CMCs)和愈傷組織(Dedifferentiated plant cells。DDCs)。DDCs是經細胞脫分化所形成的細胞系，而CMCs則是具有持續(xù)性分裂能力的未脫分化的細胞系。本文考察

2、了喜樹CMCs懸浮培養(yǎng)體系和DDCs懸浮培養(yǎng)體系的顯微鏡特性差異、對γ射線及類輻射藥物的敏感度差異，進一步確定了誘導所得喜樹CMCs具有植物干細胞的特性。
　　喜樹堿(Camptothecin。CPT)和10-羥基喜樹堿(10-Hydroxycamptothecin,10-OH-CPT)是喜樹中的有效成分，它們的合成途徑涉及到很多酶和基因。本文對喜樹CMCs和DDCs中4個關鍵酶：色氨酸脫羧酶(tryptophan decarbo

3、xylase。TDC)、異胡豆苷合成酶(strictosidine synthase。STR)、色氨酸合成酶(tryptophan synthetase。TSB)、3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶(3-hydroxy-3-methylgutaryl-coenzyme A reductase。HMGR)的相關基因tdc1、tdc2、str、tsb、hmg2、hmg3的表達量進行了對比，結果發(fā)現(xiàn)喜樹CMCs2中tdc2、str基因的表達

4、量遠遠高于CMCs1和 DDCs中的表達量。
　　香豆素是存在于自然界中具有抗腫瘤、抗真菌以及抗凝血作用的一類化合物。然而，香豆素類衍生物水溶性低且毒性大，限制了其臨床應用。本文以Pechmann法合成4個甲基取代的香豆素：4,8-二甲基-7-羥基香豆素(I)、4,7-二甲基-6-羥基香豆素(II)、4-甲基-6,7-二羥基香豆素(III)和4,7-二甲基-5-羥基香豆素(IV)，并首次利用喜樹DDCs體系和CMCs體系對這4個香

5、豆素進行生物轉化，以期得到其高效低毒的轉化產物。實驗中，經分離純化得到4個轉化產物，分別為4,8-二甲基香豆素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ia)、4,7-二甲基香豆素-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(IIa)、4-甲基-6-羥基-7-甲氧基香豆素(IIIa)和4,7-二甲基香豆素-5-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(IVa)，其中Ia、IIa和IVa為新化合物。本文還考察了4個底物的最佳投底量、最佳共培養(yǎng)時間；檢測了底物和轉化產物的單胺氧化