奈比洛爾對(duì)腎性高血壓大鼠腎臟的保護(hù)作用及其與ADMA的關(guān)系.pdf

1、目的：
　　探討奈比洛爾對(duì)腎性高血壓大鼠腎臟的保護(hù)作用及其與非對(duì)稱性二甲基精氨酸(ADMA)的關(guān)系，為腎性高血壓的治療提供新思路。
　　方法：
　　選取體重150g雄性wistar大鼠，用內(nèi)徑0.2mm銀夾夾閉左腎動(dòng)脈，制備兩腎一夾(2K1C)腎性高血壓大鼠模型。術(shù)后4周用尾袖套法進(jìn)行無(wú)創(chuàng)血壓測(cè)量，若收縮壓(SBP)大于160mmHg認(rèn)為模型成功。同等體重健康大鼠僅分離左腎動(dòng)脈，但是不夾閉腎動(dòng)脈，作為偽手術(shù)對(duì)照組(i.

2、g蒸餾水)。2K1C大鼠隨機(jī)分成4組(n=6)：①2K1C腎性高血壓模型組(i.g蒸餾水)；②2K1C+奈比洛爾組(i.g10mg/day)；③2K1C+阿替洛爾組(i.g80mg/day)；④2K1C+卡托普利組(i.g20mg/day)，給藥8周。術(shù)前和術(shù)后不同時(shí)間段測(cè)量SBP并收集24小時(shí)尿液，用以檢測(cè)尿液中N-乙酰-氨基葡萄糖苷酶(NAG)、尿肌酐(Ucr)、β2-微球蛋白(β2-MG)、微量白蛋白（mALB）和尿蛋白排泄量并計(jì)

3、算內(nèi)生肌酐清除率(Ccr)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，大鼠麻醉后經(jīng)腹主動(dòng)脈采血，用以檢測(cè)血漿一氧化氮(NO)、尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、血漿腎素活力(PRA)、血管緊張素II(AngII)和非對(duì)稱性二甲基精氨酸(ADMA)濃度；并快速分離左右腎臟，用于觀察腎臟結(jié)構(gòu)以及western blotting實(shí)驗(yàn)；HE染色觀察腎臟結(jié)構(gòu)；PAS染色觀察腎小球系膜增生；Masson及α-SMA免疫熒光觀察腎臟纖維化；KIM-1、nephrin免疫熒光觀察

4、腎小管和足細(xì)胞的損傷；透射電鏡觀察腎小球?yàn)V過(guò)屏障完整性，足細(xì)胞形態(tài)及基底膜厚度；蛋白印跡法測(cè)iNOS，eNOS，nNOS， DDAH1和2，PRMT1蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　與偽手術(shù)組比較，2K1C模型組腎動(dòng)脈狹窄術(shù)后1周SBP開(kāi)始升高，在第4周達(dá)到高值,并穩(wěn)定持續(xù)至術(shù)后12周，高達(dá)183.22±2.64mmHg。奈比洛爾、阿替洛爾和卡托普利均可逐漸降低2K1C大鼠SBP。2K1C大鼠的尿液體積和飲水量在術(shù)后1周急劇升

5、高，2周達(dá)到峰值，尿肌酐在術(shù)后4周內(nèi)明顯低于偽手術(shù)組(P<0.05)，這種差異逐漸縮小,到實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí),此三項(xiàng)改變?cè)趦山M之間無(wú)顯著性差異。與偽手術(shù)組比較，2K1C組尿蛋白排泄量在術(shù)后持續(xù)穩(wěn)定升高至術(shù)后12周，奈比洛爾和卡托普利均可降低2K1C大鼠尿蛋白，奈比洛爾效果較卡托普利顯著(P<0.05)。2K1C組大鼠血漿、左腎組織中AngII和PRA與偽手術(shù)組比較有上升趨勢(shì)但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但右腎組織中的AngII的含量明顯高于偽手術(shù)組，三藥都能

6、降低右腎AngII水平。HE染色觀察到2K1C組大鼠腎小球代償性肥大，PAS染色和 Masson染色及α-SMA熒光染色顯示腎小球系膜增生、腎小球和間質(zhì)纖維化程度明顯增加；透射電鏡提示2K1C大鼠腎小球?yàn)V過(guò)屏障基底膜厚度明顯高于偽手術(shù)組，足細(xì)胞足突廣泛融合，nephrin免疫熒光顯示足細(xì)胞nephrin表達(dá)減少，上述改變尤以右側(cè)腎臟顯著。除阿替洛爾外，奈比洛爾和卡托普利均可不同程度改善2K1C大鼠上述改變，尤以奈比洛爾顯著(P<0.05

7、)。2K1C組大鼠尿液β2-MG/Ucr，mALB/Ucr，NAG的濃度和腎小管KIM-1表達(dá)明顯增加，給予奈比洛爾能夠有效降低β2-MG/Ucr，mALB/Ucr，NAG濃度和KIM-1的表達(dá)。并且奈比洛爾能夠降低Scr和BUN的水平，提高Ccr(P<0.05)。雖然2K1C與偽手術(shù)組血漿NO無(wú)明顯差異，但2K1C組大鼠左腎nNOS和左右兩腎eNOS表達(dá)明顯低于偽手術(shù)組，左腎iNOS表達(dá)則明顯高于偽手術(shù)組，奈比洛爾能夠增加2K1C大鼠

8、血漿NO水平，上調(diào)右腎nNOS和eNOS表達(dá)，下調(diào)左腎iNOS的表達(dá)。另一方面，2K1C組血漿ADMA增高，雖然兩側(cè)腎臟DDAH1表達(dá)無(wú)顯著性差異，但PRMT1表達(dá)顯著增加，且左腎DDAH2表達(dá)顯著降低(P<0.05)。奈比洛爾，阿替洛爾，卡托普利雖然不同程度影響PRMT1，DDAH1，2表達(dá)，但僅奈比洛爾降低2K1C大鼠血漿ADMA水平。
　　結(jié)論：
　　奈比洛爾可顯著改善2K1C腎性高血壓大鼠腎功能損傷和結(jié)構(gòu)變化，此作用