不同長(zhǎng)度聚乳酸膜小間隙縫合修復(fù)周圍神經(jīng)損傷的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：為探討小間隙縫合法修復(fù)外周神經(jīng)損傷的最適間隙距離，本實(shí)驗(yàn)采用聚乳酸膜小間隙縫合修復(fù)大鼠腓總神經(jīng)損傷，探討不同間隙縫合修復(fù)周圍神經(jīng)損傷的效果。
　　方法：1.動(dòng)物模型的建立:由南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供SPF級(jí)健康雄性3月齡清潔級(jí)Sprague-Dawley(SD)大鼠40只，體重250～300g，用0.1％戊巴比妥鈉對(duì)大鼠進(jìn)行腹腔注射麻醉，劑量為0.1ml/100g。待麻醉充分后，備皮，俯臥位固定于手術(shù)操作板上，絡(luò)合碘對(duì)右

2、下肢手術(shù)區(qū)進(jìn)行消毒，鋪無(wú)菌洞巾。按小間隙縫合的間隙距離，實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)分為4組，每組10只:
　　嚴(yán)格按照無(wú)菌操作原則，取右膝后外側(cè)縱行切口，切開皮膚、皮下組織及筋膜，鈍性分離肌肉，在手術(shù)顯微鏡下，顯露腓總神經(jīng)，用鋒利的顯微組織剪于距肌門近側(cè)5mm處橫斷腓總神經(jīng)，根據(jù)腓總神經(jīng)兩斷端的形狀、紋理、營(yíng)養(yǎng)血管的走行等特點(diǎn)將兩斷端準(zhǔn)確對(duì)齊，防止神經(jīng)斷端扭轉(zhuǎn)。剪取約5mm×4mm的矩形聚乳酸膜，將其置于神經(jīng)斷端中間，分別保持神經(jīng)斷端有1mm、

3、2mm、3mm、0mm的間隙（分別記為E1組、E2組、E3組及N組），用7-0無(wú)損傷縫合線把神經(jīng)遠(yuǎn)、近斷端的神經(jīng)外膜12點(diǎn)和6點(diǎn)位與聚乳酸膜兩邊縫合2針固定，將聚乳酸膜包繞神經(jīng)斷端成管狀，縫合聚乳酸膜游離緣，使聚乳酸膜呈一直徑與神經(jīng)直徑相當(dāng)?shù)拿荛]套管，于聚乳酸膜套管兩端適當(dāng)加1到3針將神經(jīng)外膜與聚乳酸套管縫合固定。用生理鹽水沖洗術(shù)野，徹底止血，將實(shí)驗(yàn)神經(jīng)復(fù)還于原來(lái)的肌肉組織間隙中，逐層縫合肌膜、筋膜和皮膚。
　　2.觀察指標(biāo):

4、r>　?、傩g(shù)后觀察實(shí)驗(yàn)大鼠踝關(guān)節(jié)及足趾恢復(fù)背屈活動(dòng)情況;
　?、谏窠?jīng)電生理檢查:術(shù)后6周，用0.1％戊巴比妥鈉0.1ml/100g腹腔注射麻醉大鼠，待麻醉顯效滿意后，備皮，肢體妥善固定，用肌電圖儀測(cè)量大鼠再生神經(jīng)傳導(dǎo)速度;
　?、凵窠?jīng)大體觀察:術(shù)后6周，暴露右側(cè)腓總神經(jīng)，手術(shù)顯微鏡下觀察再生神經(jīng)解剖形態(tài);
　?、芙M織形態(tài)學(xué)觀察:縫合口部位取材，分離并切取腓總神經(jīng)小間隙段及其遠(yuǎn)端5mm，4％多聚甲醛固定，石蠟包埋，行橫行

5、、縱行切片，常規(guī)行蘇木素-伊紅染色（HE染色）、Anti-S100 antibody-Astrocyte（標(biāo)記許旺細(xì)胞）及Anti-200kD Neurofilament Heavy（標(biāo)記神經(jīng)纖維）免疫組化反應(yīng)，顯微鏡下觀察，采用Image-Pro Plus6.0圖像分析軟件測(cè)量神經(jīng)纖維數(shù);
　?、菰偕窠?jīng)超微結(jié)構(gòu)觀察:分離并切取縫合口遠(yuǎn)端約1mm長(zhǎng)再生神經(jīng)，戊二醛固定，醋酸鈾、枸櫞酸鉛染色，透射電鏡下觀察再生神經(jīng)超微結(jié)構(gòu);

6、>　?、逌y(cè)量肌肉濕重比:完整分離并切取大鼠雙側(cè)小腿前外側(cè)肌群，紗布吸干表面血液后立即用電子天平稱量肌肉濕重，精確到0.01g，計(jì)算濕重比（濕重比=手術(shù)側(cè)小腿前外側(cè)肌群濕重/非手術(shù)側(cè)小腿前外側(cè)肌群濕重）。
　　3.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
　　采用SPSS20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析.數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，多組樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析(One-Way ANOVA)，兩兩比較采用LSD檢驗(yàn)，P＜0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)

7、果：①術(shù)后實(shí)驗(yàn)大鼠踝關(guān)節(jié)及足趾恢復(fù)背屈活動(dòng)情況:術(shù)后大鼠右小腿前外側(cè)肌群均癱瘓，呈垂足畸形，右踝背屈障礙，右足趾伸直障礙。0mm無(wú)間隙縫合組（N組）平均25日恢復(fù)踝關(guān)節(jié)及足趾背屈運(yùn)動(dòng)，而1、2、3mm小間隙縫合組(E1、E2、E3組)則分別為16日、22日及30日恢復(fù)踝關(guān)節(jié)及足趾背屈活動(dòng)。
　　②神經(jīng)電生理檢查（腓總神經(jīng)傳導(dǎo)速度）:術(shù)后6周，右側(cè)腓總神經(jīng)傳導(dǎo)速度E1組＞E2＞N組＞E3組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

8、　?、凵窠?jīng)大體觀察:術(shù)后6周，暴露右側(cè)腓總神經(jīng)，手術(shù)顯微鏡下觀察再生神經(jīng)解剖形態(tài)可見(jiàn):聚乳酸膜已完全降解，未見(jiàn)神經(jīng)與周圍組織粘連。1mm小間隙縫合組（E1組）再生神經(jīng)較光滑，神經(jīng)遠(yuǎn)段直徑基本正常;2mm小間隙縫合組（E2組）再生神經(jīng)欠光滑，神經(jīng)遠(yuǎn)段直徑稍變細(xì);3mm小間隙縫合組（E3組）再生神經(jīng)明顯膨大，神經(jīng)遠(yuǎn)段明顯變細(xì);0mm無(wú)間隙縫合組（N組）再生神經(jīng)膨大，神經(jīng)遠(yuǎn)段變細(xì)。
　?、芙M織形態(tài)學(xué)觀察:
　　HE染色后鏡下觀察可

9、見(jiàn):1mm小間隙縫合組（E1組）再生神經(jīng)纖維排列整齊有序，神經(jīng)纖維粗大，許旺細(xì)胞數(shù)量多，髓鞘清晰可見(jiàn)，無(wú)結(jié)締組織增生;2mm小間隙縫合組（E2組）再生神經(jīng)纖維排列較有序，神經(jīng)纖維較粗大，許旺細(xì)胞數(shù)量較多，髓鞘較清晰，可見(jiàn)結(jié)締組織增生;3mm小間隙縫合組（E3組）再生神經(jīng)呈膨脹性生長(zhǎng)，神經(jīng)卷曲成團(tuán)，排列明顯紊亂，遠(yuǎn)段再生神經(jīng)數(shù)量最少，直徑最小，髓鞘模糊不清，結(jié)締組織增生較多;0mm無(wú)間隙縫合組（N組）再生神經(jīng)纖維較紊亂，神經(jīng)直徑較小，許旺

10、細(xì)胞數(shù)量少，髓鞘不明顯。
　　Anti-S100 antibody-Astrocyte免疫組化觀察發(fā)現(xiàn):神經(jīng)形態(tài)觀察結(jié)果基本同HE染色所見(jiàn)，由于Anti-S100 antibody-Astrocyte抗體與許旺細(xì)胞特異性結(jié)合，故其免疫組化反應(yīng)特異性顯示許旺細(xì)胞形態(tài)?？梢?jiàn)E1組許旺細(xì)胞數(shù)量多，髓鞘最厚，分層清晰整齊;E2組許旺細(xì)胞數(shù)量較多，髓鞘分層較清晰，髓鞘較厚;E3組許旺細(xì)胞數(shù)量最少，髓鞘最薄，未見(jiàn)明顯分層，髓鞘模糊不清;N組再

11、生神經(jīng)許旺細(xì)胞數(shù)量少，髓鞘較薄，髓鞘分層不明顯。
　　Anti-200kD Neurofilament Heavy免疫組化反應(yīng)觀察發(fā)現(xiàn):神經(jīng)形態(tài)觀察結(jié)果基本同HE染色所見(jiàn)，由于Anti-200kD Neurofilament Heavy抗體與神經(jīng)纖維特異性結(jié)合，故其免疫組化反應(yīng)特異性顯示神經(jīng)纖維形態(tài)?？梢?jiàn)E1組再生神經(jīng)纖維數(shù)量最多，排列最為整齊有序，再生神經(jīng)纖維直徑最粗;E2組再生神經(jīng)纖維數(shù)量較多，排列較有序，再生神經(jīng)纖維直徑較粗

12、;E3組再生神經(jīng)呈膨脹性生長(zhǎng)，神經(jīng)卷曲成團(tuán)，排列明顯紊亂，再生神經(jīng)數(shù)量最少，直徑最細(xì); N組再生神經(jīng)纖維數(shù)量較少，排列較紊亂，可見(jiàn)部分神經(jīng)卷曲，再生神經(jīng)纖維直徑較細(xì)。采用Image-Pro Plus6.0圖像分析軟件測(cè)量神經(jīng)纖維數(shù)發(fā)現(xiàn):E1組＞E2＞N組＞E3組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　⑤再生神經(jīng)超微結(jié)構(gòu)觀察:E1組再生神經(jīng)軸突橫截面呈圓形，再生神經(jīng)纖維數(shù)量最多，排列最為整齊有序，再生神經(jīng)纖維直徑最粗，髓鞘最厚，板

13、層呈同心圓狀致密、整齊包繞再生神經(jīng)軸突，髓鞘最為成熟;E2組再生神經(jīng)軸突橫截面基本呈圓形，偶有扭曲，再生神經(jīng)纖維數(shù)量較多，排列較為整齊，再生神經(jīng)纖維直徑較粗，髓鞘較厚，髓鞘板層較整齊、致密;E3組再生神經(jīng)軸突橫截面形狀明顯不規(guī)則，再生神經(jīng)纖維數(shù)量最少，排列紊亂，直徑最細(xì)，髓鞘最薄，髓鞘可見(jiàn)扭曲及畸形，板層排布極其紊亂、疏松，髓鞘模糊不清;N組再生神經(jīng)軸突橫截面形狀較不規(guī)則，再生神經(jīng)纖維數(shù)量較少，排列較紊亂，直徑較細(xì)，髓鞘較薄，髓鞘可見(jiàn)扭