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文檔簡介
1、腸道病毒71型(EV71)屬于小核糖核酸病毒，感染后可引起手足口病(hand-foot-mouth disease，HFMD)，部分患兒可引起一系列中樞神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥，出現(xiàn)重癥病例和死亡病例。因此，建立一種可以快速均相檢測EV71 IgM抗體的方法在HFMD早期診斷中顯得尤為重要。
根據(jù)HFMD發(fā)病特點，我們建立了具有高敏感性、精確性、均一性、背景低、廣泛的動態(tài)檢測范圍、無需洗滌及樣本需求量極少等特點的針對EV71 IgM
2、的AlphaLISA檢測技術(shù)。
在本實驗中，我們成功的表達純化了EV71 VP11-297及EV71 VP11-177重組蛋白，經(jīng)鑒定后將抗原生物素化。通過ELISA法摸索出生物素化的EV71 VP1的最適量為37.5ng。優(yōu)化供體微珠、受體微珠、血清量等實驗條件，初步建立了基于VP1的EV71 IgM抗體的AlphaLISA檢測方法。
我們首先使用ELISA法對10份健康人的血清和30份手足口病病人（30份
3、手足口病病人核酸檢測EV71均為陽性）的血清進行評價，健康人的血清中EV71 IgM檢測均為陰性，30份手足口病病人的血清中EV71 IgM陽性為16份。然后用建立的AlphaLISA方法體系對上述樣本進行檢測，檢測結(jié)果顯示：在10個健康人中，AlphaLISA方法檢測EV71 IgM也為陰性。在30份手足口病病人血清中，ELISA方法檢測出的16份EV71 IgM陽性的樣本，AlphaLISA方法檢測EV71 IgM均為陽性，然而Al
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