家兔的Oddi括約肌功能異常模型制作及其組織內(nèi)NOS和VIP變化的意義.pdf

1、圍繞在膽總管壺腹和膽胰管末端的括約肌，統(tǒng)稱為Oddi括約肌(sphincter of Oddi，SO)。正常情況下，SO在維持膽道壓力、促進(jìn)膽汁排泄以及防止十二指腸液和胰液返流方面起重要作用。目前，國內(nèi)外學(xué)者已經(jīng)認(rèn)識到SO異常包括SO功能異常(sphincter of Oddi dysfunction，SOD)和SO解剖形態(tài)異常兩個部分，前者可能不合并形態(tài)的異常變化，而后者可能在形態(tài)異常的基礎(chǔ)上并沒有表現(xiàn)出功能異常。但是，SO測壓(sp

2、hincter 0f Oddi matlometry SOM)是公認(rèn)的檢測SO功能異常的金標(biāo)準(zhǔn)。我們采用多種手術(shù)方法制作SOD的模型，并應(yīng)用SOM的方法觀察實(shí)驗(yàn)組家兔模型的各項壓力指標(biāo)，同時與對照組的正常家兔壓力指標(biāo)比較，以便判斷模型制作是否成功。此外，我們應(yīng)用免疫組化鏈酶親和素．過氧化物酶法(SABC法)觀察各組家兔SO和十二指腸乳頭中一氧化氮合酶(Nitric oxidesynthase，NOS)和血管活性腸肽(Vasoactive

3、 intestinal polypeptide，VIP)的變化，探討VIP和一氧化氮(Nitric oxide，NO)在SOD發(fā)病機(jī)制中的作用。 材料： 1、分組方法 將77只成年家兔隨機(jī)分為正常對照組8只、膽囊切除組12只、迷走神經(jīng)干切斷組8只、膽總管不完全結(jié)扎組11只、SO不完全結(jié)扎組9只、膽囊不完全結(jié)扎組9只、膽管注入胰酶組12只、SO注射酒精組8只，雄性40只，雌性37只。 2、儀器和藥品

4、 ①三通道測壓管(長2米，外徑1.7mm，3個側(cè)孔徑0.5mm，間隔2mm．)②PC polygram HR高分辨，多通道胃腸功能測定儀③低順應(yīng)性水灌注系統(tǒng)④20％氨基甲酸乙酯；95％酒精；動物胰酶制劑(粉劑)方法1、手術(shù)操作氨基甲酸乙酯(1.0g/kg)靜脈注射麻醉，全部實(shí)驗(yàn)組均經(jīng)腹中線開腹，且徹底止血后，行兩層關(guān)腹。(1)對照組：僅行開關(guān)腹術(shù)；(2)膽囊切除組：結(jié)扎膽囊管和膽囊動脈，逆行切除膽囊；(3)迷走神經(jīng)干切斷組：于腹段食管兩

5、側(cè)游離出左，右迷走神經(jīng)干，用絲線將其懸吊，各切除約1cm的神經(jīng)干；(4)膽總管不完全結(jié)扎組：于十二指腸乳頭開口處對側(cè)緣縱行切開十二指腸約1cm，將無菌硬膜外插管逆行插入膽總管，鈍性分離膽總管周圍組織，4＃絲線繞過膽總管，將膽總管結(jié)扎在硬膜外插管上，然后，拔出插管，縫合十二指腸切口；(5)SO不完全結(jié)扎組：如上述切開十二指腸，應(yīng)用可吸收線橫行縫扎乳頭開口，觀察仍有少量膽汁流出，縫合十二指腸切口；(6)膽囊不完全結(jié)扎組：牽拉肝臟于腹外，顯露

6、膽囊，縫合針帶絲線繞過膽囊體中部，結(jié)扎閉合約50％橫斷面積；(7)膽管注入胰酶組：如上述切開十二指腸，將無菌硬膜外插管逆行插入膽總管，關(guān)閉十二指腸切口，并固定插管在腸壁上，縫合腹膜及腹肌，同時再次固定插管于腹肌上，鈍性分離出一皮下隧道至家兔后頸部，插管沿道至后頸部切口，再次固定插管，關(guān)閉腹部外皮。將配制10％動物胰酶2ml自插管逆行注入膽總管，1hr和2hr后，分別再注入2ml胰酶，每次注入后均閉管10min；(8)SO注射酒精組：如上

7、述切開十二指腸，乳頭周圍2mm內(nèi)均勻四個點(diǎn)各注射95％酒精0.1ml，縫合十二指腸切口。對照組和實(shí)驗(yàn)組均于術(shù)前12hr和當(dāng)日禁食不禁水，除膽管注入胰酶組于注完胰酶24hr后測壓外，其余各組均于術(shù)后1周進(jìn)行壓力測定。 2、測壓步驟 氨基甲酸乙酯(1.0g/kg)麻醉滿意后，經(jīng)原切口進(jìn)腹腔，在十二指腸乳頭開口的對側(cè)緣，縱行切開十二指腸約1cm，暴露乳頭。將高分辨，多通道胃腸功能測定儀接通三通道測壓管，應(yīng)用低順應(yīng)性水灌注系統(tǒng)，

8、以十二指腸壓力為曲線零點(diǎn)標(biāo)定后，經(jīng)乳頭將測壓管逆行插入膽總管。觀察曲線，確定插入膽總管后，穩(wěn)定30sec，進(jìn)行測壓3-5 min，然后逐漸撤拉導(dǎo)管達(dá)SO處，直視下并結(jié)合電腦顯示曲線于高壓力區(qū)處可確定測壓管側(cè)孔位于括約肌最佳位置。穩(wěn)定30 sec后進(jìn)行壓力測定3-5min，記錄壓力曲線以待分析。 3、觀察指標(biāo) SO基礎(chǔ)壓；SO收縮幅度；SO收縮頻率；SO收縮間期；膽總管壓力4、數(shù)據(jù)處理本實(shí)驗(yàn)計算的壓力指標(biāo)均為計量資料，計量

9、數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((-x)±s)表示。應(yīng)用spss11.5統(tǒng)計分析軟件，采用單因素方差分析的方法行各實(shí)驗(yàn)組與對照組比較。P<0.05為差異顯著，P<0.01為差異非常顯著。 結(jié)果： 1、膽囊切除組家兔SO功能變化SO基礎(chǔ)壓較對照組顯著升高，平均為36.61±8.60mmHg(p<0.01)；2、迷走神經(jīng)切斷干組家兔SO功能變化SO基礎(chǔ)壓較對照組顯著升高，平均為28.54±7.66mmHg(p<0.05)；3、膽總管不完