脂肪來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、鑒定、體內(nèi)重建造血及分化為血液、血管細(xì)胞的研究.pdf

1、研究目的1了解成人脂肪來(lái)源的MSC的生物學(xué)特性,細(xì)胞免疫標(biāo)志及與骨髓來(lái)源的MSC進(jìn)行比較;2探索在致死量照射的NOD/SCID小鼠體內(nèi)輸入單細(xì)胞來(lái)源的脂肪來(lái)源的MSC能否重建造血并在NOD/SCID小鼠分化為血液系統(tǒng)的細(xì)胞;3探索局部血管損傷后的NOD/SCID小鼠體內(nèi)輸入單細(xì)胞來(lái)源的脂肪來(lái)源的MSC能否分化為血管內(nèi)皮細(xì)胞.研究方法1體外采用液體培養(yǎng)、分離,擴(kuò)增成人脂肪來(lái)源的MSC,利用極限稀釋法挑選并擴(kuò)增單細(xì)胞克隆.在4-6代檢測(cè)細(xì)胞

2、生長(zhǎng)狀態(tài),細(xì)胞周期,免疫表型及光鏡形態(tài)觀察,并與骨髓來(lái)源的MSC比較;2 NOD/SCID小鼠致死量照射后體內(nèi)輸入經(jīng)PKH26染色的脂肪來(lái)源的MSC,并輔助以G-CSF皮下注射,兩個(gè)月后病理冰凍切片分析成人脂肪來(lái)源的MSC的分布;流式細(xì)胞儀檢測(cè)PKH26和成熟血液細(xì)胞表型雙陽(yáng)性的細(xì)胞;RT-PCR分析人特異性基因片段的表達(dá);GM-CSF集落培養(yǎng)分析是否存在人源性的GM系祖細(xì)胞;3 NOD/SCID小鼠制造局部皮膚血管損傷模型,體內(nèi)輸入經(jīng)