PD-L1的表達(dá)和基因多態(tài)性在胃癌中的診斷及預(yù)后價(jià)值的研究.pdf

1、目的:胃癌作為最普遍的惡性腫瘤之一，發(fā)病率近年來(lái)不斷上升。然而，目前針對(duì)胃癌早期還沒(méi)有比較有效的診斷，監(jiān)測(cè)轉(zhuǎn)移情況和判斷預(yù)后的檢測(cè)方法。免疫治療也在胃癌的治療中顯示出光明的前景。但是，據(jù)相關(guān)報(bào)道，胃癌細(xì)胞可以通過(guò)多種機(jī)制來(lái)防止免疫系統(tǒng)產(chǎn)生有效的抗腫瘤免疫反應(yīng)，從而逃避免疫監(jiān)視。
　　研究表明PD-L1能增加入抗原特異性T細(xì)胞克隆的凋亡并抑制CD4和CD8 T細(xì)胞的體外活化。并且PD-L1在包括胃癌在內(nèi)的多個(gè)腫瘤中高表達(dá)。最新研究已

2、經(jīng)表明，PD-1或PD-L1的抗體可緩解的PD-L1對(duì)細(xì)胞毒性T細(xì)胞的抑制作用，從而促進(jìn)與激活細(xì)胞毒性T細(xì)胞消滅腫瘤細(xì)胞的能力。并對(duì)于腫瘤中斷PD1/PD-L1的信號(hào)通路對(duì)胃癌是一個(gè)有希望的治療策略。脫嘌呤/脫嘧啶內(nèi)切核酸酶1(APE1)不僅能修復(fù)DNA的損傷還可作為氧化還原活性蛋白，激活許多轉(zhuǎn)錄因子，APE1表達(dá)可增強(qiáng)胃癌的發(fā)生。SNP是對(duì)癌癥易感性研究的重要的因子之一。之前的研究表明在PD-L1的幾個(gè)外顯子的基因多態(tài)性已被發(fā)現(xiàn)，并與

3、其自身免疫疾病相關(guān)。針對(duì)胃癌的PD-L1相關(guān)的SNP還鮮有報(bào)道。第一部分首先檢測(cè)了PD-L1和APE1，特別是PD-L1腫瘤免疫與107例胃癌患者之間的相關(guān)性。第二部分基于第一部分的臨床資料，采用PCR-CTPP法對(duì)PD-L1基因單核苷酸多態(tài)性與胃癌易感性關(guān)系進(jìn)行了研究;為以PD-L1為靶點(diǎn)的胃癌治療策略研究提供相關(guān)理論支持。
　　方法:本課題分為兩個(gè)部分。第一部分我們整理收集107例胃癌患者的組織標(biāo)本采用免疫組化的方法對(duì)APE1

4、和PD-L1的表達(dá)情況進(jìn)行染色。觀察這兩種基因在胃癌組織中的表達(dá)情況，并分析他們的表達(dá)水平與臨床病例特征、預(yù)后以及這兩種基因的相關(guān)性。第二部分，我們收集整理了141例健康對(duì)照人群以及101例胃癌患者的，外周血血清標(biāo)本，并從中提取了DNA，運(yùn)用PCR-CTPP(引物聚合酶鏈反應(yīng))技術(shù)來(lái)分析了PD-L1的三個(gè)位點(diǎn)rs4143185，rs2890658和rs17718883(rs4143185位點(diǎn)由上海Invitrogen公司采用測(cè)序技術(shù)進(jìn)行

5、分析)單核苷酸多態(tài)性與胃癌易感性以及預(yù)后之間的關(guān)系。所有數(shù)據(jù)運(yùn)用EXCEL表格登記，收集;使用SPSS19.0軟件對(duì)收集的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果:胃癌組織標(biāo)本107例中，管狀腺癌26例，粘液腺癌6例，印戒細(xì)胞癌22例，低分化癌例53例。PD-L1的陽(yáng)性率為50.5％(54/107); APE1的陽(yáng)性率為86.9％(93/107)。PD-L1與浸潤(rùn)深度(OR=3.37; P=0.005)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(OR=2.68; P=0.

6、020)，腫瘤分化程度(OR=3.19; P=0.008)以及病理類型(x2=8.676; P=0.013)有顯著差異。同時(shí)，PD-L1在高分化癌，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和深層浸潤(rùn)腫瘤表達(dá)率更高。另外，Kaplan-Meier生存分析表明PD-L1的陽(yáng)性表達(dá)與胃癌的較差的預(yù)后顯著相關(guān)(P＜0.05)。
　　APE1在癌旁組織弱表達(dá)或不表達(dá)。大約86.9％(93/107)胃癌組織APE1陽(yáng)性表達(dá)。APE1在胃癌中的表達(dá)在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(OR=3.2

7、6; P=0.037)，浸潤(rùn)深度(OR=7.61;P=0.001)以及生存時(shí)間有顯著差異(OR=10.91;P=0.040)。APE1的陽(yáng)性表達(dá)與胃癌的較差的預(yù)后顯著相關(guān)(P=0.035)。49.5％(53/107)的胃癌組織共同表達(dá)這兩個(gè)蛋白。Spearman rank相關(guān)分析顯示APE1與PD-L1正相關(guān)(r=0.336，P＜0.01)，PD-L1 and APE1共同表達(dá)的胃癌患者生存預(yù)后差(P=0.003)。腫瘤部位，浸潤(rùn)深度，

8、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，腫瘤分化程度以及病理類型與生存預(yù)后顯著相關(guān)。賁門(mén)區(qū)的腫瘤中位生存時(shí)間(22士2.42 months)較胃體部癌中位時(shí)間(45±3.86 months，P=0.003)短。管狀腺癌中位時(shí)間最長(zhǎng)，為41個(gè)月，然而低分化癌的中位生存時(shí)間只有20士2.24月，(P=0.004)。浸潤(rùn)深度是胃癌的一個(gè)預(yù)后影響因素(RR=19.91;95％ CI,:4.83-82.03;P=0.000)。
　　在rs17718883中與CC純合野

9、生基因型相比，雜合突變CG基因型與GG純合突變基因型以及CG（雜合突變）+GG（純合突變）基因型的個(gè)體患胃癌的風(fēng)險(xiǎn)顯著降低(校正OR=0.238;95％CI:0.12～0.49; P＜0.001);(校正OR=0.057;95％CI:0.007～0.45; P＜0.001);（校正OR=0.196;95％CI:0.10～0.38;P＜0.001）?？ǚ綑z驗(yàn)計(jì)算后，我們發(fā)現(xiàn)，rs17718883位點(diǎn)的等位基因G相對(duì)于等位基因C而言顯著降低

10、了胃癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)(OR=0.210;95％CI:0.12～0.38; P＜0.001)。
　　rs17718883位點(diǎn)的CC基因型與CG基因型以及CG+GG基因型患者的中位生存時(shí)間分別為:22個(gè)月，56個(gè)月;差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.009); CG+GG的中位生存時(shí)間為56個(gè)月(CC vs.CG+GG P=0.014);但是CC vs.GG突變基因型未發(fā)現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，而且中位時(shí)間20個(gè)月低于CC突變的22個(gè)月，我們認(rèn)為是由于GG

11、突變只有1例，例數(shù)太少導(dǎo)致數(shù)據(jù)不均衡引起的。COX回歸模型用來(lái)分析rs17718883位點(diǎn)我們發(fā)現(xiàn)，該位點(diǎn)的突變基因型都是OS的有利因素，CG(HR.0.229，P=0.006)CG+GG(HR:0.266，P=0.007)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，GG(HR:0.984，P=0.988)差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論:第一部分:
　　1.在胃癌組織中PD-L1和APE1的陽(yáng)性表達(dá)在浸潤(rùn)深度，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，病理類型，總生存時(shí)間中存在顯

12、著差異。PD-L1與APE1的表達(dá)都升高。
　　2.胃癌患者組織高表達(dá)PD-L1和APE1較低表達(dá)者預(yù)后差。
　　3.PD-L1與APE1的表達(dá)正性相關(guān)，對(duì)兩者的聯(lián)合檢測(cè)對(duì)胃癌的診斷以及預(yù)后的評(píng)估有一定價(jià)值。
　　第二部分:
　　1.PD-L1(rs17718883)位點(diǎn)與胃癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)顯著相關(guān)，其等位基因G相能顯著降低胃癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。
　　2.rs17718883雜合突變CG基因型可能提示患者能獲得較好的預(yù)后