膽道閉鎖Kasai術(shù)后肝臟改變與肝臟纖維化研究.pdf

1、目的：
　　1.探討膽道閉鎖（Biliary atresia，BA）患兒 Kasai手術(shù)后自體肝的形態(tài)及結(jié)構(gòu)改變，分析其與Kasai術(shù)后肝臟損傷程度及膽管炎之間的關(guān)系；
　　2.研究膽道閉鎖患兒的自體肝組織細(xì)胞表面糖蛋白14（CD14），血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子34（CD34），轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1（TGF-β1）在肝組織中的表達(dá)，及其在肝纖維化中的作用。
　　方法：
　　1.收集2012年5月至2013年12月期間天津市第

2、一中心醫(yī)院膽道閉鎖患兒Kasai術(shù)后行肝移植手術(shù)的自體肝臟標(biāo)本16例為實(shí)驗(yàn)組，其中男10例，女6例，同時(shí)收集天津市兒童醫(yī)院16例膽道閉鎖患兒行Kasai手術(shù)時(shí)肝臟活檢標(biāo)本為陽(yáng)性對(duì)照組，其中男11例，女5例。觀察膽道閉鎖患兒Kasai術(shù)后肝臟病理變化特點(diǎn)，并簡(jiǎn)單分析對(duì)膽管炎發(fā)生的影響。采用HE和免疫組化技術(shù)等檢測(cè)肝臟纖維化程度、膽管及血管的增生情況、肝細(xì)胞損傷情況以及炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)情況，觀察Kasai術(shù)后病理改變。
　　2.選取20

3、13年1月至2014年1月天津市兒童醫(yī)院BA患兒術(shù)中肝活檢標(biāo)本（Kasai組）、天津市第一中心醫(yī)院BA患兒接受肝移植自體肝組織（移植組）、天津市兒童醫(yī)院膽管擴(kuò)張癥患兒術(shù)中肝活檢標(biāo)本（擴(kuò)張組，作為對(duì)照組），每組15例，術(shù)中留取肝組織。進(jìn)行 HE及免疫組化染色檢測(cè)三種蛋白在肝組織中表達(dá)及組織定位情況，分析其與肝纖維化之間的關(guān)系。應(yīng)用圖像分析軟件（Image-Pro-Plus）分別計(jì)算CD14，TGF-β1積分光密度值（IOD），CD34陽(yáng)性

4、表達(dá)面積（Area），SPSS17.0軟件統(tǒng)計(jì)分析 CD14，TGF-β1，CD34之間表達(dá)差異及其相關(guān)性。
　　結(jié)果：
　　1.實(shí)驗(yàn)組中生后出現(xiàn)黃疸時(shí)間為0~15天，行Kasai手術(shù)時(shí)間為44~105天，出現(xiàn)膽管炎的頻次為1~6次，肝移植距離Kasai手術(shù)后時(shí)間5~67月。陽(yáng)性對(duì)照組中肝活檢的肝臟標(biāo)本外觀普遍增大，淤膽嚴(yán)重，質(zhì)地中等；HE和免疫組化結(jié)果顯示肝臟纖維化分級(jí)介于II~IV級(jí)之間，匯管區(qū)膽栓情況介于0~I級(jí)之間，

5、匯管區(qū)血管增生情況介于III~IV級(jí)之間，膽管增生介于I~III級(jí)之間。實(shí)驗(yàn)組中肝臟外觀多數(shù)呈現(xiàn)部分段、葉萎縮情況，也有部分肝臟標(biāo)本呈現(xiàn)肥厚改變；肝臟纖維化分級(jí)都屬于IV級(jí)，匯管區(qū)膽栓情況I-II級(jí)之間，匯管區(qū)血管增生情況IV級(jí)，膽管增生III~IV級(jí)之間。
　　2. CD14表達(dá)于肝髓竇內(nèi)皮細(xì)胞，成纖維細(xì)胞，炎細(xì)胞；TGF-β1表達(dá)于成纖維細(xì)胞、膽管上皮細(xì)胞、炎細(xì)胞；CD34表達(dá)于匯管區(qū)血管內(nèi)皮細(xì)胞。與對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組三種蛋白

6、表達(dá)增加，從肝纖維化I級(jí)至IV級(jí)中，CD14、TGF-β1蛋白表達(dá)量呈逐漸下降趨勢(shì)，CD34表達(dá)逐步增多。實(shí)驗(yàn)組中三種蛋白在肝組織表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），其中CD14與TGF-β1肝組織表達(dá)相關(guān)性顯著， TGF-β1、CD34肝組織表達(dá)呈正相關(guān)(P<0.01)。
　　結(jié)論：
　　1.膽道閉鎖患兒Kasai術(shù)后肝臟損傷受Kasai手術(shù)時(shí)間影響，早期行Kasai術(shù)肝組織血管/膽管增生不明顯，肝小葉有輕微淤膽；手術(shù)較

7、晚的患兒肝臟膽汁淤積嚴(yán)重，假小葉、橋接纖維化，膽管增生明顯。膽道閉鎖Kasai術(shù)后接受肝移植的患兒終末期肝臟纖維化及淤膽嚴(yán)重，膽管，血管增生嚴(yán)重，匯管區(qū)增寬，炎細(xì)胞浸潤(rùn)灶。
　　2. BA肝纖維化進(jìn)展期CD14，TGF-β1表達(dá)逐漸增加，參與BA肝纖維化過程，并對(duì)BA肝硬化形成起到推動(dòng)作用。TGF-β1與CD34在三組肝組織中顯著正相關(guān)，可能在纖維化中相互作用，在纖維化進(jìn)展中起到一定的作用。到移植終末期，各種細(xì)胞缺失，纖維組織增多