抗水稻黃單胞菌深海獨島枝芽胞桿菌A493及其活性物質研究.pdf

1、人們已經對陸地微生物活性次級代謝產物進行了廣泛的研究，而對海洋微生物相關方面的研究還比較欠缺。相對于陸地微生物，海洋微生物生活在非常特殊的環(huán)境中，其代謝產物的多樣性和代謝途徑的獨特性決定了海洋微生物次級代謝產物具有新穎的結構和特異的生物活性。本研究從海洋微生物中篩選具有抗植物病原菌作用的菌株，并對其中一株深海獨島枝芽胞桿菌（Vrgibacillus dokdonensis進行抗菌化合物分離鑒定研究工作。
　　 以水稻黃單胞菌等為

2、指示菌，采用平板對峙法對411株海洋細菌進行了抗菌篩選，初篩獲得具有抗菌活性的海洋菌株81株，復篩獲得具有穩(wěn)定抗菌活性的菌株7株，最后通過測定抗菌譜，得到一株抗菌譜特異并且穩(wěn)定拮抗水稻黃單胞菌的深海獨島枝芽胞桿菌（V.dokdonensis A493）。
　　 A493產抗菌活性物質可以耐受100℃的高溫，在pH4-10和紫外照射環(huán)境中活性穩(wěn)定，可以通過3kDa的超濾管，并且對蛋白酶不敏感。該物質具有很強的極性，只能溶解在水和甲

3、醇中。酸沉淀和硫酸銨沉淀實驗結果排除了活性物質是脂肽類物質的可能性。
　　 通過離子交換色譜法提取，再經兩次薄層層析硅膠板回收分離，得到了精制樣品。經過LC-MS分析，初步判斷活性物質分子量為317Da;經Doskochilova溶劑系統(tǒng)紙層析驗證，該物質與鏈霉素的紙層析圖譜極為相近；其紫外吸收為末端吸收，茚三酮顯色法顯示黃色。一般氨基糖苷類物質分子量是大于400Da的，結合該物質抗菌譜的特異性和產生菌分離環(huán)境的特殊性，表明該活

4、性物質極有可能是一種新型的氨基糖苷類抗生素，初步命名為ZH-11。
　　 對A493產活性物質ZH-11發(fā)酵條件進行了初步優(yōu)化，使其單位體積發(fā)酵液抑菌效果提高18％?；钚晕镔|ZH-11相對效價測定的實驗表明，A493發(fā)酵無菌上清液對水稻黃單胞菌的抑菌效果相當于15.6μg/ml的標準鏈霉素。
　　 對水稻白葉枯病害的溫室實驗表明，經過A493無菌上清液處理，水稻生長20d后對水稻白葉枯病害防治效果達到了66.7%，且對水