RNA干擾誘導(dǎo)HIF-1α表達(dá)對(duì)膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎的影響及其作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的：
　　RNA干擾誘導(dǎo)HIF-1α表達(dá)對(duì)小鼠Ⅱ型膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎模型（CIA）的影響及其作用機(jī)制的研究。同時(shí)探討shRNA特異性干擾沉默HIF-1α后對(duì)小鼠CIA模型VEGF表達(dá)的影響，明確這種改變是否與阻斷HIF-1α信號(hào)抑制炎癥因子分泌有關(guān)，從而確定HIF-1α在類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）發(fā)病機(jī)制中的作用。
　　方法：
　　1、構(gòu)建HIF-1α抑制表達(dá)的病毒。合成小鼠HIF-1α因子干擾序列，對(duì)目的基因進(jìn)行測(cè)序克隆和

2、鑒定，構(gòu)建HIF-1α抑制表達(dá)載體。包裝并收集s hRNA特異性干擾沉默HIF-1α的慢病毒。
　　2、建立CIA小鼠關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型。構(gòu)建小鼠CIA模型60例后隨機(jī)分為3組，每組20例：生理鹽水對(duì)照組（給予生理鹽水治療）、陰性病毒對(duì)照組（給予空病毒治療）和陽(yáng)性病毒治療組（給予shRNA特異性干擾沉默HIF-1α的慢病毒治療），以及第4組：完全對(duì)照組20例。
　　3、病毒干預(yù)治療。通過(guò)轉(zhuǎn)染HIF-1α慢病毒后，應(yīng)用免疫組化、H

3、E染色、ELISA法、實(shí)時(shí)熒光定量（real-time PCR）法及免疫印跡法（Western Blot）分別檢測(cè)CIA小鼠關(guān)
　　節(jié)滑膜病理變化以及血清和關(guān)節(jié)滑膜細(xì)胞中炎癥因子（如IL-1β、IL-6、P2X7、TNF、VEGF、HIF-1α）的mRNA及蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1、成功構(gòu)建shRNA特異性干擾沉默HIF-1α的慢病毒以及作為對(duì)照的空病毒，包裝濃縮后獲得高滴度的慢病毒。
　　2、成功復(fù)制