穿山龍薯蕷皂苷酶反應(yīng)的研究.pdf

1、本論文主要研究穿山龍薯蕷總皂苷的提取方法,對微生物sp.s00c菌所產(chǎn)的穿山龍薯蕷皂苷酶進行分離純化,并對此純化酶性質(zhì)進行研究。用此酶水解穿山龍薯蕷總皂苷,得到穿山龍薯蕷皂苷酶解產(chǎn)物,將酶解產(chǎn)物進行分離提純并進行純度檢測。
　　 采用乙醇提取法提取皂苷,從1 kg中草藥穿山龍飲片中提取穿山龍薯蕷總皂苷33.13 g,得率為3.31％。經(jīng)薄層層析檢測知其主要成分為3-O-｛a-L-鼠李糖基-(1→4)-[a-L-鼠李糖基-(1→2

2、)-]｝-(B-D-吡喃葡萄糖基)-薯蕷皂苷元。
　　 為得到高產(chǎn)穿山龍薯蕷皂苷酶的菌,從三種微生物菌中篩選出微生物sp.s00c菌作為研究對象。該菌所產(chǎn)的酶能水解穿山龍薯蕷皂苷的3位碳糖基,制備出低糖基皂苷。篩選出穿山龍為最佳誘導劑,誘導劑濃度為15％,最佳發(fā)酵時間為5d。粗酶液經(jīng)硫酸銨沉淀、透析后經(jīng)DEAE-Cellulose DE52陰離子交換柱梯度洗脫得到純化酶。利用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳對其進行純度檢測及蛋白分子量

3、測定,測得其分子量為59kDa。薯蕷皂苷酶的性質(zhì)為:最適酶反應(yīng)溫度為40℃,最適pH值為5.0,酶溫度穩(wěn)定的范圍為20℃～50℃,酶的pH值穩(wěn)定范圍為5.0～6.0,米氏方程為1/[V]=2102/S+43.87,最大反應(yīng)速度Vmax=2.29x10-2μmol/h,米氏常數(shù)Km=48.18mol/L。該酶可以水解柴胡皂苷,不能水解朱砂根皂苷和白頭翁皂苷。該薯蕷皂苷酶可以水解主要含3-O-｛a-L-鼠李糖基-(1→2)-[B-D-葡萄糖

4、基-(1→3)-]｝-(B-D-吡喃葡萄糖基)-薯蕷皂苷元的薯蕷皂苷底物,使之形成單糖基薯蕷皂苷元。薯蕷皂苷酶的酶解條件為:最佳反應(yīng)時間24h,最佳底物濃度1.0％,酶反應(yīng)最佳溫度為40℃,最佳pH值為5.0。
　　 以穿山龍薯蕷總皂苷為底物進行酶反應(yīng),酶解產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析分離得到3-O-(B-D-吡喃葡萄糖基)-薯蕷皂苷元單體(酶解產(chǎn)物Ⅰ)3.57 g,得率為17.85％,高效液相色譜檢測其純度為69.41％。同時,也從酶解產(chǎn)