心肌細(xì)胞凋亡及其線粒體途徑激活在大鼠冠狀動(dòng)脈微栓塞致心肌損傷中的作用.pdf

1、目的：探討心肌細(xì)胞凋亡及線粒體凋亡途徑激活對(duì)大鼠冠狀動(dòng)脈微栓塞致心肌收縮功能受損的影響及作用
　　 方法：選取100只成年雄性SD大鼠，隨機(jī)分為微栓塞組(CME組，n=50)和假手術(shù)對(duì)照組(S組，n=50)。采用夾閉升主動(dòng)脈15s經(jīng)左室注入直徑42μm微栓塞球0.1ml(3000個(gè))，建立大鼠冠狀動(dòng)脈微栓塞模型，設(shè)為微栓塞組。S組為注射生理鹽水代替微栓塞球，各組根據(jù)觀察時(shí)間隨機(jī)分為術(shù)前0h，術(shù)后3h、6h、12h、24h5個(gè)時(shí)間

2、點(diǎn)組，每組10只。隨后選取心肌凋亡最明顯的術(shù)后6h時(shí)間點(diǎn)觀察Z-VAD-fmk(廣譜caspase抑制劑)抑制心肌凋亡效果，20只大鼠隨機(jī)分為微栓塞6h對(duì)照組(C組)、Z-VAD-fmk抑制劑組(Ⅰ組)，每組10只。Ⅰ組為微栓塞術(shù)前半小時(shí)經(jīng)尾靜脈注射Z-VAD-fmk3mg/kg。以上每組均予心臟超聲檢測心肌收縮功能(LVEF、CO、LVEDVd、FS)。用TUNEL法及活化的caspase3蛋白檢測心肌細(xì)胞凋亡，Western blo

3、t檢測線粒體途徑凋亡蛋白bax、bcl-2、bak、bc1-xl及細(xì)胞色素c的表達(dá)。
　　 結(jié)果：(1)與S組比較，除CME Oh組外，CME組在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的心功能LVEF均顯著下降，(3h：79.18±3.04％vs85.53±3.47％；6h：72.88±3.27％vs82.67+3.50％;12h：68.70±3.8284.20±3.51％；24h：72.11±3.24％vs83.50±3.71％)(2)與心功能LVEF改

4、變相一致的是，術(shù)后3h、6h、12h、24h各時(shí)間點(diǎn)，CME組的心肌細(xì)胞凋亡率、caspase3/GAPDH及線粒體途徑bax/bcl-2、細(xì)胞色素C/GAPDH表達(dá)倍數(shù)均比S組顯著增加。與CME3h比較，CME6h增加最顯著(心肌凋亡率：3.17±1.26％vs1.76±0.68％；caspase3/GAPDH表達(dá)倍數(shù)1.64±0.096 vs.0.37±0.099；bax/bcl-21.84±0.030 vs.0.48±0.006；

5、細(xì)胞色素C/GAPDH1.37±0.35vs.0.99±0.31)；心肌細(xì)胞凋亡率與心肌LVEF呈明顯負(fù)相關(guān)關(guān)系，(3h組：r=-0.893，p=0.001；6h組：r=-0.856，p=0.003；r12h組::r=-0.964，p=0.002；24h組::r=-0.829，p=0.004)。(3)Z-VAD-fmk干預(yù)凋亡后，Ⅰ組與C組比較，心肌凋亡率顯著下降(0.20±0.11％vs3.17±1.26％P＜0.05)，caspas

6、e3蛋白表達(dá)下降(0.62±0.30 vs2.99±1.45 P＜0.05)，心肌收縮功能LVEF明顯改善(77.96±3.68％vs72.88±3.27％；P＜0.05)。
　　 結(jié)論：大鼠冠狀動(dòng)脈微栓塞致心肌細(xì)胞凋亡顯著增加，具有動(dòng)態(tài)變化規(guī)律，線粒體—caspase信號(hào)途徑可能參與了冠狀動(dòng)脈微栓塞后心肌細(xì)胞凋亡，心肌細(xì)胞凋亡及其線粒體途徑激活，是導(dǎo)致微栓塞后心肌收縮功能受損的一個(gè)重要機(jī)制。Z-VAD-fmk早期抑制線粒體—c