第一部分：不同心臟狀態(tài)下心梗邊緣區(qū)注射骨髓間充質(zhì)干細胞的比較;第二部分：體外循環(huán)和停跳的心臟狀態(tài)對于經(jīng)冠狀動脈內(nèi)移植骨髓間充質(zhì)干細胞的影響.pdf

1、目的：主要研究停跳與不停跳兩種心臟狀態(tài)下，經(jīng)豬心梗模型心肌注射骨髓間充質(zhì)干細胞后全身細胞的分布情況。 方法：實驗方法分為體內(nèi)和體外實驗兩部分體外實驗部分：從雄性中華小型豬髂骨處抽取骨髓，體外培養(yǎng)擴增骨髓間充質(zhì)干細胞并進行鑒定。將超順磁氧化鐵顆粒和骨髓間充質(zhì)干細胞共同孵育培養(yǎng)36-48小時。使用普魯士藍染色評價標記后的細胞鐵離子標記的效率；使用臺盼藍染色檢驗標記后細胞的活性。體內(nèi)實驗部分：用帶球囊血管造影導管經(jīng)股動脈導入雌性豬左冠

2、狀動脈前降支，在第二對角支的近端將球囊擴張90分鐘造成急性心梗模型。模型建立后7天隨機分為四組。第1組為停跳心臟細胞注射組(n=6)，體外循環(huán)后心臟停跳，標記的細胞(1×108)經(jīng)心肌注入心梗周邊區(qū)。第2組為不停跳心臟細胞注射組(n=6)，相同的細胞在跳動下心臟經(jīng)心肌注入心梗周邊區(qū)。第3組停跳心臟對照組(n=6)和第4組不停跳心臟對照組(n=6)中，相同劑量的生理鹽水分別在停跳和不停跳心臟狀態(tài)下經(jīng)心肌注入心梗周邊區(qū)。3天后，體內(nèi)細胞分布

3、通過核磁共振的T2*變化及雄性細胞特異性的SRY基因的實時定量PCR檢測來評價。并取動物心，肝，脾，肺，腎的標本，切片后進行普魯士藍染色，觀察細胞在體內(nèi)的分布和形態(tài)。 結(jié)果：體外實驗部分：普魯士蘭染色的超順磁鐵納米顆粒標記的骨髓間充質(zhì)干細胞顯示，藍染的鐵的小囊泡或小顆粒分布于幾乎每個細胞的胞漿中，其標記效率幾乎達到100％。并且，在臺盼蘭排斥實驗中，95％以上的細胞拒染臺盼蘭，可見骨髓間充質(zhì)干細胞經(jīng)鐵標記后有良好的活性。體內(nèi)實驗

4、部分：細胞可以在心，脾，肺和肝中檢測到。1，2組中大部分的注射細胞滯留在心臟，并且1組中心臟細胞的滯留較2組多(T2* 改變：22.3±2.2 versus 17.00±0.84：SRY gene:0.150±0.062 versus 0.072±0.003)。病理學檢查可以見移植細胞呈普魯士藍染色陽性，并與磁共振影像學的顯影有很好的一致性。 結(jié)論：經(jīng)心肌注射骨髓間充質(zhì)干細胞后，許多細胞流向心臟以外的器官，尤其是脾臟。在心臟停跳