艾葉揮發(fā)油抗真菌活性成分和白僵蠶對大鼠紫癜性腎炎治療作用的研究.pdf

1、目的：1）通過對艾葉提取的揮發(fā)油進(jìn)行有效成分的分離鑒定，對艾葉揮發(fā)油、桉樹腦和4-松油烯醇等的抗真菌作用進(jìn)行初步探討，為深度開發(fā)、儲(chǔ)存和利用艾葉提供有效的基礎(chǔ)資料。2）探索并建立HSPN大鼠模型，觀察白僵蠶對HSPN大鼠蛋白尿及腎組織病理形態(tài)的影響，探討白僵蠶對HSPN大鼠的治療作用及其可能作用機(jī)制。
　　方法：1）采用水蒸氣蒸餾法從艾葉中提取揮發(fā)油并GC/MS分析，用薄層色譜法和硅膠柱層析法從艾葉揮發(fā)油中分離桉樹腦和4-松油烯醇

2、，通過TLC法和GC/MS法定性鑒別，用NMR對其分子結(jié)構(gòu)進(jìn)行確認(rèn)；用菌絲生長速率法計(jì)算艾葉揮發(fā)油及其分離的單體對疫霉、黑曲霉、粉紅聚端孢、青霉、鏈格孢的抑菌率，用二倍梯度稀釋法測定其最低抑菌濃度(MIC)；ATD、SPME、超聲提取和燃燒等方法收集艾葉揮發(fā)性成分，分析艾葉不同狀態(tài)下有效成分含量變化。2）將70只SD大鼠（雄性）按隨機(jī)數(shù)字表法分為空白組、模型組、陽性對照組、白僵蠶低中高劑量組，每組10只。除了空白組，其他組以BSA+LP

3、S+CC14方法造就IgA腎病模型，同時(shí)用熱性藥物灌胃造就瘀熱模型，復(fù)合成為HSPN動(dòng)物模型。造模及治療結(jié)束后檢測24h尿液中的尿蛋白、尿膽素、肌酐量；光鏡下觀察腎小球系膜變化；采用間接免疫熒光法檢測腎小球IgA沉積；免疫組化法檢測腎臟組織中凋亡因子Fas、轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)；TUNEL末端標(biāo)記法檢測細(xì)胞凋亡。
　　結(jié)果：1）艾葉揮發(fā)油（得油率0.65％）GC/MS分析總檢測出30種化合物，其中有效成分桉樹腦和4-

4、松油烯醇百分含量分別為22.71%和7.34%。分離提純后，TLC法和GC/MS分析樣品和對照品，Rf值和保留時(shí)間基本一致， NMR確定桉樹腦和4-松油烯醇的分子結(jié)構(gòu)；艾葉揮發(fā)油對5種真菌抑菌率范圍15.2%~74.5%，桉樹腦對5種真菌抑菌率范圍25.6%~69.4%，4-松油烯醇對物種真菌抑菌率范圍18.2%~72.9%，對疫霉和黑曲霉抑菌效果較好。艾葉揮發(fā)油對疫霉、黑曲霉、粉紅聚端孢、青霉的MIC為50μl.ml-1，對鏈格孢M(jìn)I

5、C為100μl.ml-1。桉樹腦對5種真菌的MIC均50μl.ml-1。4-松油烯醇對5種真菌的MIC均40μl.ml-1；ATD、SPME法收集艾葉不做處理的揮發(fā)性成分，均含有桉樹腦和4-松油烯醇成分，艾葉超聲波提取的揮發(fā)油、燃燒煙氣，均含有桉樹腦成分，卻檢測不到4-松油烯醇。2）模型組24h尿蛋白量均顯著高于空白組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01)，病理結(jié)果提示造模后腎組織腎小球系膜明顯增生，腎小管腫脹，腎小球上有IgA沉積，說明造

6、模有效；給藥6周后，與模型組相比較，白僵蠶各劑量組大鼠24h尿蛋白，尿膽素，尿肌酐含量降低，均有顯著性差異（P<0.01）；HE染色和PAS染色結(jié)果，白僵蠶中、高劑量組腎小球系膜細(xì)胞輕度增生，系膜區(qū)輕度增寬，管腔無擠壓現(xiàn)象，較模型組明顯改善；免疫組化檢測在模型組大鼠腎組織中Fas和TGF-β1表達(dá)，前者表達(dá)減弱，后者表達(dá)增強(qiáng)；TUNEL末端標(biāo)記法檢測細(xì)胞凋亡，模型組抑制凋亡。
　　結(jié)論：1）艾葉揮發(fā)油、桉樹腦、4-松油烯醇對5種真