奧曲肽-紫杉醇偶聯(lián)物通過(guò)p38MAPK信號(hào)通路逆轉(zhuǎn)人卵巢癌A2780-Taxol紫杉醇耐藥性的研究.pdf

1、本文分為以下兩個(gè)部分進(jìn)行探討：
　　第一部分 奧曲肽-紫杉醇偶聯(lián)物通過(guò)p38MAPK信號(hào)通路逆轉(zhuǎn)人卵巢癌A2780/Taxol紫杉醇耐藥性的體外實(shí)驗(yàn)研究
　　目的:研究p38MAPK信號(hào)通路在奧曲肽-紫杉醇偶聯(lián)物(本實(shí)驗(yàn)室前期合成，專利號(hào):ZL201310232603.X)逆轉(zhuǎn)人卵巢癌細(xì)胞A2780/Taxol紫杉醇的耐藥性中的可能作用機(jī)制。
　　方法:(1)外購(gòu)卵巢癌耐藥細(xì)胞株A2780/Taxol傳代培養(yǎng)，取對(duì)數(shù)生

2、長(zhǎng)期細(xì)胞繼續(xù)傳代分8組:①空白對(duì)照組（Control組）:RPMI1640完全培養(yǎng)液;②奧曲肽(Octreotide，OCT)組（OCT組）:含10μg/ml OCT的RPMI1640完全培養(yǎng)液;③奧曲肽+環(huán)生長(zhǎng)抑素(Cyclo-somatostatin，CSS)組（OC組）:含10μg/ml OCT和0.234μg/ml CSS的RPMI1640完全培養(yǎng)液;④紫杉醇(Paclitaxel，PTX)組（PTX組）:含8μg/ml PTX

3、的RPMI1640完全培養(yǎng)液;⑤紫杉醇+奧曲肽組（PO組）:含10μg/ml OCT和8μg/ml PTX的RPMI1640完全培養(yǎng)液;⑥紫杉醇+奧曲肽+環(huán)生長(zhǎng)抑素組（POC組）:含10μg/ml OCT、8μg/ml PTX和0.234μg/ml CSS的RPMI1640完全培養(yǎng)液;⑦紫杉醇-奧曲肽偶聯(lián)組（P-O組）:含20μg/ml OCT-PTX偶聯(lián)物的RPMI1640完全培養(yǎng)液;⑧紫杉醇-奧曲肽+環(huán)生長(zhǎng)抑素組（P-OC組）:含2

4、0μg/ml OCT-PTX偶聯(lián)物和0.234μg/ml CSS的RPMI1640完全培養(yǎng)液。(2)檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組耐藥細(xì)胞系p38MAPK信號(hào)通路的表達(dá)活性，檢測(cè)p38的磷酸化水平以及此信號(hào)通道下游VEGF蛋白的表達(dá)變化。(3)流式細(xì)胞儀檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組A2780/Taxol細(xì)胞的凋亡情況。(4)免疫組化法檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組A2780/Taxol細(xì)胞內(nèi)βⅢ微管蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果:P-O組p38MAPK信號(hào)通路的表達(dá)活性最低，P-p38MA

5、PK的表達(dá)水平及其下游VEGF蛋白表達(dá)水平同步下調(diào)，且細(xì)胞凋亡率最高(9.65％);βⅢ微管蛋白顆粒密度減低，數(shù)量減少，染色變淺。而P-OC組，p38MAPK信號(hào)通路活性上調(diào)，P-p38MAPK的表達(dá)水平及其下游VEGF蛋白表達(dá)水平增加，細(xì)胞凋亡率比P-O組明顯降低(3.95％);βⅢ微管蛋白顆粒密度升高，數(shù)量增加，染色變深。
　　結(jié)論:奧曲肽-紫杉醇偶聯(lián)物可通過(guò)抑制p38MAPK信號(hào)通路的表達(dá)，逆轉(zhuǎn)人卵巢癌細(xì)胞A2780/Tax

6、ol的紫杉醇耐藥性。
　　第二部分 奧曲肽-紫杉醇偶聯(lián)物通過(guò)p38MAPK信號(hào)通路逆轉(zhuǎn)人卵巢癌A2780/Taxol紫杉醇耐藥性的荷瘤裸鼠實(shí)驗(yàn)研究
　　目的:構(gòu)建人卵巢癌A2780/Taxol耐藥細(xì)胞裸鼠移植瘤模型。在體模式下研究p38MAPK信號(hào)通路在奧曲肽-紫杉醇偶聯(lián)物逆轉(zhuǎn)人卵巢癌A2780/Taxol裸鼠移植瘤對(duì)紫杉醇的耐藥性中的作用。
　　方法:(1)將A2780/Taxol制成單細(xì)胞懸液，以2×106個(gè)細(xì)胞/

7、只，分別接種于4-6周齡雌性裸鼠右側(cè)腋窩靠近背部皮下，共接種80只。荷瘤裸鼠成瘤后使用隨機(jī)數(shù)表法將80只接種的裸鼠隨機(jī)分成8組，每組裸鼠各10只;(2)各實(shí)驗(yàn)組荷瘤裸鼠予每周尾靜脈注射不同藥物一次，共三周。Control組:尾靜脈予生理鹽水0.1ml; OCT組:尾靜脈予150nmol/kg OCT0.1ml; OC組:尾靜脈予奧曲肽150nmol/kg+環(huán)生長(zhǎng)抑素1.282nmol/kg共0.1ml; PTX組:尾靜脈予150nmol

8、/kg紫杉醇0.1ml;PO組:尾靜脈予紫杉醇150nmol/kg+奧曲肽150nmol/kg共0.1ml; POC組:尾靜脈予紫杉醇150nmol/kg+奧曲肽150nmol/kg+1.282nmol/kg共0.1ml;P-O組:尾靜脈予紫杉醇-奧曲肽150nmol/kg0.1ml; P-OC組:尾靜脈予紫杉醇-奧曲肽150nmol/kg+環(huán)生長(zhǎng)抑素1.282nmol/kg共0.1ml。第四周初處死裸鼠。(3)檢測(cè)各組裸鼠移植瘤p38

9、MAPK信號(hào)通路的表達(dá)活性，檢測(cè)p38的磷酸化水平以及此信號(hào)通道下游VEGF蛋白的表達(dá)變化。(4)流式細(xì)胞儀檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組裸鼠移植瘤A2780/Taxol細(xì)胞的凋亡情況。(5)免疫組化法檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組移植瘤細(xì)胞內(nèi)βⅢ微管蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果:接種A2780/Taxol的裸鼠在一周后均有成瘤，平均直徑0.8cm，均未見(jiàn)到裸鼠精神萎靡、活動(dòng)遲緩、腹瀉、腫瘤破潰等異常情況。P-O組裸鼠移植瘤體積縮小最顯著，平均體積0.73cm3，與其他各

10、實(shí)驗(yàn)組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。P-O組P-p38MAPK信號(hào)通路及其下游VEGF蛋白表達(dá)水平均最低，與其他各實(shí)驗(yàn)組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。P-O組移植瘤A2780/Taxol細(xì)胞凋亡率最高(10.56％)，與其他各實(shí)驗(yàn)組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。P-O組βⅢ微管蛋白顆粒密度最低，數(shù)量最少，染色最淺。P-OC作用后移植瘤體積明顯增大，平均體積1.65cm3，與其他各實(shí)驗(yàn)組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0