新型基因運輸材料的制備及應(yīng)用研究.pdf

1、①聚陰離子電解質(zhì)對陽離子脂質(zhì)體基因運輸?shù)牟牧细纳蒲芯?br>　　陽離子脂質(zhì)體作為高效基因運輸材料研究廣泛。但其表面暴露的正電荷引起的細(xì)胞毒性限制了它的應(yīng)用。本論文使用四種生物相容性良好的聚陰離子電解質(zhì)多糖，即海藻酸，透明質(zhì)酸，果膠和聚L谷氨酸，來包裹陽離子脂質(zhì)體/pDNA復(fù)合物進行基因運輸，通過“遮蔽”陽離子脂質(zhì)體表面的正電荷，不但降低了細(xì)胞毒性，也提高了轉(zhuǎn)染效率。溶血實驗驗證了其可能的機制，在細(xì)胞將復(fù)合物內(nèi)吞后，溶酶體的酸性pH環(huán)境使

2、聚電解質(zhì)側(cè)鏈發(fā)揮疏水作用形成膜擾動，從而加速基因逃逸。研究結(jié)果證明，聚陰離子電解質(zhì)協(xié)助的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染是一種可能實現(xiàn)臨床應(yīng)用的基因運輸方法。
　?、谛滦蜔o機材料輔助小分子PEI的基因運輸研究
　　低分子量的支狀聚乙烯亞胺由于其低毒性在作為非病毒基因運輸載體得到了利用，然后，它在生物領(lǐng)域的進一步應(yīng)用由于其效率較低而得到了限制。在此論文中，我們合成了微型花狀氧化鋅納米顆粒來提高對 PEI的基因運輸。采用四種方法對氧化鋅的形貌進行控制

3、合成。掃面電子顯微鏡的觀察顯示出其良好的花狀形貌。通過使用氧化鋅運載PEI/pDNA復(fù)合物顆粒，該體系較PEI/pDNA復(fù)合物自身提高了轉(zhuǎn)染效率。細(xì)胞內(nèi)吞實驗解釋了其可能機制，氧化鋅顆粒的尖端穿透到細(xì)胞表面，加速了基因材料進入細(xì)胞的過程。這些研究表明，針狀微結(jié)構(gòu)具有作為有效協(xié)助生物大分子的運輸?shù)臐摿Α?br>　?、垡环N新型自組裝材料的合成及其對mRNA的運輸研究
　　通過合成一種含有與鋅離子螯合以后能夠特異性結(jié)合磷酸基團的官能團，

4、并且酸性可降解的化合物，希望實現(xiàn)化合物與mRN A的自組裝，將mRN A聚攏成納米顆粒，實現(xiàn)由于穩(wěn)定性以及其線性結(jié)構(gòu)而難以用常規(guī)方法進行運輸?shù)膍RN A的基因運輸。我們對合成的材料的化學(xué)生物性質(zhì)進行了測定。對鋅離子毒性測定實驗確定了使用的鋅離子量能保持在細(xì)胞水平上無毒。凝膠阻滯實驗表明其官能團能夠成功結(jié)合基因上的磷酸基團。酸降解實驗表明其在溶酶體環(huán)境下的可斷裂，以及釋放疏水鏈的可能性。后續(xù)細(xì)胞生物實驗有待進一步探究以確認(rèn)其作用效果以及發(fā)