PI3K、AKT-1、AKT-2和NFκB在2型糖尿病骨質(zhì)疏松大鼠骨骼肌表達(dá).pdf

1、目的：2型糖尿病(Type2 diabetes，T2DM)與骨質(zhì)疏松癥(osteoporosis，OP)均為常見全身性代謝性疾病，伴隨經(jīng)濟(jì)發(fā)展、人們生活方式改變及人口老齡化，發(fā)病率均呈逐年上升趨勢。2型糖尿病患者骨小梁密度減低，骨折危險性增加。已發(fā)現(xiàn)PI3K-AKT通路是胰島素的主要信號通路，PI3K、AKT-1、AKT-2、NFκB通過調(diào)節(jié)骨細(xì)胞的增殖、分化、抗凋亡等調(diào)節(jié)骨代謝；骨骼肌不僅是胰島素抵抗發(fā)生的重要部位，也是參與骨代謝的重

2、要器官。目前關(guān)于PI3K、AKT-1、AKT-2、NFκB在2型糖尿病合并骨質(zhì)疏松骨骼肌組織中如何表達(dá)及二者發(fā)病機(jī)制間的相關(guān)性尚無研究，本研究旨在初步探討PI3K、AKT-1、AKT-2、NFκB在2型糖尿病骨質(zhì)疏松大鼠骨骼肌表達(dá)水平，為防治糖尿病骨質(zhì)疏松提供實驗依據(jù)和理論基礎(chǔ)。
　　方法：100只2.5—3月齡健康雌性Wistar大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后隨機(jī)分為正常對照組(假手術(shù)組，NS組)24只，單純?nèi)ヂ殉步M(NOVX組)26只，

3、2型糖尿病對照組(假手術(shù)組，DS組)24只，2型糖尿病去卵巢組(DOVX組)26只，組間大鼠體重差異無統(tǒng)計學(xué)意義。采用高脂飼料喂養(yǎng)聯(lián)合小劑量STZ腹腔注射法制作T2DM大鼠模型，雙側(cè)卵巢切除法制作OP大鼠模型。去卵巢后4周、8周、12周各組隨機(jī)選取5只拉頸處死后分離右側(cè)股四頭肌，制備石蠟標(biāo)本，提取骨骼肌組織總RNA，分別應(yīng)用免疫組化技術(shù)及反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測NS組、NOVX組、DS組、DOVX組骨骼肌組織PI3K、AK

4、T-1、AKT-2、NFκB蛋白及mRNA表達(dá)。實驗數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件分析，P<0.05具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.免疫組化結(jié)果：PI3K、AKT-1、AKT-2、NFκB在骨骼肌細(xì)胞陽性表達(dá)表現(xiàn)為胞漿中棕黃色顆粒。
　　1.1 PI3K表達(dá)水平：去卵巢后4周時NOVX組低于NS組(P<0.05)，DS組低于NS組(P<0.05)，DOVX組低于DS組(P<0.05)，DOVX組低于NOVX組(

5、P<0.05)；去卵巢后8周時NOVX組明顯低于NS組(P<0.05)，DS組低于NS組(P<0.05)，DOVX組明顯低于DS組(P<0.05)，DOVX組低于NOVX組(P<0.05)；12周時NOVX組低于NS組(P<0.05)，DS組低于NS組(P<0.05)，DOVX組低于DS組(P<0.05)，DOVX組低于NOVX組(P<0.05)。
　　1.2 AKT-1表達(dá)水平：去卵巢后4周時NOVX組低于NS組(P<0.05)

6、，DS組低于NS組(P<0.05)，DOVX組低于DS組(P<0.05)，DOVX組低于NOVX組(P<0.05)；去卵巢后8周時NOVX組略高于NS組，且無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，DS組低于NS組(P<0.05)，DOVX組低于DS組，但無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，DOVX組低于NOVX組(P<0.05)；去卵巢后12周時NOVX組低于NS組(P<0.05)，DS明顯低于NS組(P<0.05)，DOVX組高于DS組(P<0.05

7、)，DOVX組低于NOVX組，但無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。
　　1.3 AKT-2表達(dá)水平：去卵巢后4周時NOVX組低于NS組(P<0.05)，DS組低于NS組(P<0.05)，DOVX組低于DS組(P<0.05)，DOVX組低于NOVX組(P<0.05)；去卵巢后8周時NOVX組低于NS組，但無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，DS組低于NS組(P<0.05)，DOVX組低于DS組但無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，DOVX組低于NO

8、VX組(P<0.05)；去卵巢后12周時NOVX組低于NS組(P<0.05)，DS組明顯低于NS組(P<0.05)，DOVX組低于DS組(P<0.05)，DOVX組明顯低于NOVX組(P<0.05)。
　　1.4 NFκB表達(dá)水平：去卵巢后4周時NOVX組高于NS組(P<0.05)，DS組明顯高于NS組(P<0.05)，DOVX組高于DS組(P<0.05)，DOVX組明顯高于NOVX組(P<0.05)；去卵巢后8周時NOVX組高于

9、NS組(P<0.05)，DS組高于NS組(P<0.05)，DOVX組高于DS組(P<0.05)，DOVX組高于NOVX組(P<0.05)；去卵巢后12周時NOVX組高于NS組、DS組高于NS組，但均無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，DOVX組高于DS組(P<0.05)，DOVX組高于NOVX組(P<0.05)。
　　2.RT-PCR結(jié)果：
　　2.1 PI3K結(jié)果：去卵巢后4周時NOVX組低于NS組(P<0.05)，DS組明顯低

10、于NS組(P<0.05)，DOVX組高于DS組，但無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，DOVX組低于NOVX組(P<0.05)；去卵巢后8周時NOVX組低于NS組(P<0.05)，DS組低于NS組(P<0.05)，DOVX組低于DS組，但無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，DOVX組低于NOVX組(P<0.05)；12周時NOVX組低于NS組(P<0.05)，DS組明顯低于NS組(P<0.05)，DOVX組低于DS組，但無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)

11、，DOVX組低于NOVX組(P<0.05)。
　　2.2 AKT-1結(jié)果：去卵巢后4周時NOVX組低于NS組(P<0.05)，DS組明顯低于NS組(P<0.05)，DOVX組低于DS組，但無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，DOVX組低于NOVX組(P<0.05)；去卵巢后8周時NOVX組低于NS組(P<0.05)，DS組明顯低于NS組(P<0.05)，DOVX組低于DS組，但無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，DOVX組低于NOVX組(P<

12、0.05)；去卵巢后12周時NOVX組低于NS組，DS組低于NS組，DOVX組低于DS組，DOVX組低于NOVX組，但均無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。
　　2.3 AKT-2結(jié)果：去卵巢后4周時NOVX組低于NS組，DOVX組低于DS組，DOVX組低于NOVX組，但均無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，DS組低于NS組(P<0.05)；去卵巢后8周時NOVX組低于NS組(P<0.05)，DS組低于NS組(P<0.05)，DOVX組低于D

13、S組，DOVX組低于NOVX組，但均無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)；去卵巢后12周時NOVX組低于NS組(P<0.05)，DS組明顯低于NS組(P<0.05)，DOVX組低于DS組(P<0.05)，DOVX組明顯低于NOVX組(P<0.05)。
　　2.4 NFκB結(jié)果：去卵巢后4周時NOVX組高于NS組，DS組高于NS組，DOVX組高于DS組，DOVX組高于NOVX組，但均無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)；去卵巢后8周、12周時NOV

14、X組高于NS組，DS組高于NS組，DOVX組低于DS組，DOVX組高于NOVX組，但均無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.單純?nèi)ヂ殉泊笫驪I3K、AKT-1和AKT-2在骨骼肌組織表達(dá)較正常對照組大鼠降低；NFκB表達(dá)較正常對照組大鼠升高。
　　2.2型糖尿病大鼠PI3K、AKT-1和AKT-2在骨骼肌組織表達(dá)較正常對照組大鼠降低；NFκB表達(dá)較正常對照組大鼠升高。
　　3.2型糖尿病骨質(zhì)疏松大鼠