強(qiáng)直性脊柱炎患者炎癥和骨代謝細(xì)胞因子的表達(dá)及其與中醫(yī)證型的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：強(qiáng)直性脊柱炎(Ankylosing spondylitis，AS)是一種慢性、進(jìn)行性、炎癥性自身免疫病，以侵犯骶髂關(guān)節(jié)和脊柱等中軸系統(tǒng)為主，亦可不同程度累及外周關(guān)節(jié)及肌腱附著點(diǎn)。其特征性病理變化為韌帶及肌腱附著點(diǎn)炎癥，脊柱周圍組織骨性強(qiáng)直并伴有局部骨質(zhì)疏松。其病因及發(fā)病機(jī)制尚不明確。我國(guó)AS患病率為0.3％左右，其中60％左右的患者髖關(guān)節(jié)受累，久之累及脊柱發(fā)生骨性強(qiáng)直，導(dǎo)致殘疾。骨破壞及新骨形成是AS致殘的關(guān)鍵原因。近年相關(guān)研究表

2、明，破骨細(xì)胞(osteoclast，OC)在AS骨質(zhì)破壞及骨質(zhì)疏松的病理機(jī)制中起著重要作用。而成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞的不平衡在骨病變中起到?jīng)Q定性作用。在炎性骨破壞的整個(gè)過(guò)程中，一些促炎細(xì)胞因子并不直接作用于破骨細(xì)胞的分化和激活，而是通過(guò)調(diào)節(jié)腫瘤壞死因子(TNF)超家族中的細(xì)胞核因子κB受體活化因子配體(Receptoractivator of nuclear factorsκB ligand，RANKL)、細(xì)胞核因子κB受體活化因子(Rec

3、eptor activator of nuclear factorsκB，RANK)、骨保護(hù)素(osteoprotegerin，OPG)等分子間接發(fā)揮作用。RANKL、RANK、OPG為調(diào)節(jié)破骨細(xì)胞活性所必需，是造成炎性關(guān)節(jié)骨質(zhì)破壞最重要的影響因素。而Wnt/β-cetenin信號(hào)通路對(duì)調(diào)節(jié)骨重塑具有重要作用，Dickkopf-1(DKK-1)、硬骨素(Sclerostin，SOST)為其中的關(guān)鍵因素。
　　本研究擬通過(guò)檢測(cè)活動(dòng)性

4、AS患者外周血清中巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(macrophage migration inhibitory factor，MIF)、白介素-23(Interleukin-23，IL-23)、RANKL、OPG及DKK-1、SOST的表達(dá)，并以活動(dòng)性類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)患者和健康人為對(duì)照，了解促炎癥細(xì)胞因子MIF、IL-23與骨破壞/胃重塑因素、疾病活動(dòng)性指標(biāo)的相關(guān)性，以及中醫(yī)證型與炎性細(xì)胞因子、骨破壞/骨重塑因素的相關(guān)性，試圖進(jìn)一步探討AS

5、活動(dòng)期炎癥與骨質(zhì)破壞的病理機(jī)制，為改善骨代謝和延緩骨質(zhì)破壞尋找新的治療靶點(diǎn)，并獲得活動(dòng)性AS中醫(yī)辨證的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，為中西醫(yī)結(jié)合診治AS探索新的思路和方法。
　　方法：選擇活動(dòng)性AS住院患者30例為實(shí)驗(yàn)組，同期選擇活動(dòng)性類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid Arthritis，RA)住院患者30例和15例正常健康體檢者作為對(duì)照組，并將實(shí)驗(yàn)組患者根據(jù)中醫(yī)辨證進(jìn)行分型；分別記錄AS和RA患者的年齡、性別、病程、紅細(xì)胞沉降率(ESR)采用魏氏

6、法、C反應(yīng)蛋白(CRP)采用全自動(dòng)免疫速率散射比濁法測(cè)定。采用BASDAI(Bath ankylosing spondylitis disease activity index)和DAS(Disease activityscore)28分別評(píng)價(jià)AS和RA病情活動(dòng)度。清晨空腹采肘靜脈血留取血清標(biāo)本。采用酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)檢測(cè)AS患者、RA患者和健康人外周血IL-

7、23、MIF和RANKL、OPG及DKK-1、SOST的水平。進(jìn)行炎癥細(xì)胞因子與骨代謝細(xì)胞因子的相關(guān)性分析，并進(jìn)一步分析上述炎癥和骨代謝細(xì)胞因子與AS臨床指標(biāo)、中醫(yī)辨證分型的相關(guān)性。
　　統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：所得數(shù)據(jù)均采用SPSS13.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量資料所得結(jié)果以均數(shù)4-標(biāo)準(zhǔn)差(X±s)表示。若方差齊，各組間均數(shù)比較采用單因素方差分析(one-way ANOVA)，采用LSD法進(jìn)行組間兩兩比較；方差不齊，采用非參數(shù)檢驗(yàn)。相關(guān)

8、性分析采用Pearson相關(guān)檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)。均以P＜0.05或P＜0.01認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.一般資料描述AS組：男性25例，女性5例；年齡(18-58)歲，平均年齡(29.43±8.33)歲；病程(0.3-20)年，平均病程(6.73±4.18)年；RA組：男性5例，女性25例；年齡(15-75)歲，平均年齡(46.07±14.79)歲；病程(0.2-16)年，平均病程(4.99±5.15)

9、年；正常對(duì)照組男性3例，女性12例，平均年齡(30.20±5.20)歲。
　　AS組：BASDAI(3.94±1.65)；ESR(40.25±29.79)mm/h；CRP(4.78±3.40)mg/dl；RA組：DAS28(6.06±1.25)；ESR(69.79±27.46)mm/h；CRP(4.31±4.25)mg/dl。
　　2.血清IL-23(pg/ml)水平比較AS組的IL-23水平(74.90±42.24)高于正

10、常對(duì)照組(43.32±16.06)，但低于RA組(146.60±117.46)，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。AS組IL-23水平與RA組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　3.血清MIF(ng/ml)水平比較AS組MIF水平(25.38±11.05)高于正常對(duì)照組(20.58±6.44)，低于RA組(37.70±14.19)，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。AS組MIF水平與RA組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

11、義(P＜0.05)。
　　4.血清 RANKL(pg/ml)水平比較AS組RANKL水平(21.53±17.44)高于正常對(duì)照組(8.39±5.88)和RA組(12.12±9.72)，但組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。AS組RANKL水平與RA組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　5.血清OPG(pg/ml)水平比較AS組OPG水平(5.04±1.65)高于正常對(duì)照組(3.39±1.02)，但低于RA組(8

12、.48±3.61)，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。AS組OPG水平與RA組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　6.血清DKK1(ng/ml)水平比較AS組DKK1水平(0.71±0.16)高于正常對(duì)照組(0.66±0.20)和RA組(0.70±0.28)，但組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。AS組DKK1水平與RA組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　7.血清SOST(ng/ml)水平比較

13、AS組SOST水平(1.39±0.53)高于正常對(duì)照組(0.98±1.02)和RA組(1.43±0.55)，但組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。AS組SOST水平與RA組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　8.AS患者血清中炎性細(xì)胞因子IL-23、MIF水平與臨床疾病活動(dòng)指標(biāo)的相關(guān)性AS患者血清IL-23水平與病程、ESR、CRP和BASDAI均無(wú)相關(guān)性(γ＝0.142，0.088，-0.018，-0.421，P＞

14、0.05)；血清MIF水平與病程呈顯著正相關(guān)(γ＝0.496，P＜0.01)，與ESR、CRP和BASDAI均無(wú)相關(guān)性(γ＝0.361，0.299，0.270，P＞0.05)。
　　9.AS患者血清中骨代謝指標(biāo)RANKL、OPG、DKK1、SOST水平與炎性細(xì)胞因子IL-23、MIF水平、臨床疾病活動(dòng)指標(biāo)的相關(guān)性AS患者血清中RANKL水平與病程、ESR、CRP、BASDAI、IL-23、MIF、OPG、DKK1、SOST均無(wú)相關(guān)

15、性(γ＝-0.116，0.003，0.147，0.069，-0.008，0.314，0.119，-0.199，0.163，P>0.05)；OPG水平與病程呈顯著正相關(guān)(γ＝0.520，P<0.01)，與ESR呈正相關(guān)(分別為γ＝0.379，P＜0.05)，與CRP、BASDAI、IL-23、MIF、DKK1、SOST均無(wú)相關(guān)性(γ＝0.338，0.173，0.379，0.759，0.099，0.252，P＞0.05)；DKK1水平與BA

16、SDAI呈正相關(guān)(γ＝0.414，P＜0.05)，與病程、ESR、CRP、IL-23、MIF、SOST均無(wú)相關(guān)性(γ＝0.128，0.099，-0.013，-0.105，0.087，P＞0.05)；SOST水平與病程、ESR、CRP、BASDAI、IL-23、MIF均無(wú)相關(guān)性(γ＝-0.242，0.266，0.354，-0.206，0.020，0.200，P＞0.05)。
　　10. AS組中醫(yī)證型分布及臨床相關(guān)指標(biāo)、血清中炎性細(xì)

17、胞因子IL-23、MIF水平和骨代謝指標(biāo)RANKL、OPG、DKK1、SOST水平與各證型的關(guān)系
　　10.1 AS組中醫(yī)證型分布：濕熱痹阻型3例(10％)、寒濕痹阻型8例(27％)、瘀血痹阻型14例(47％)、腎陽(yáng)虧虛型2例(6％)、肝腎不足型3例(10％)?？梢?jiàn)活動(dòng)性AS患者中主要為瘀血痹阻型。
　　10.2 AS組中醫(yī)證型與年齡、病程、影像學(xué)分級(jí)的關(guān)系
　　10.2.1 肝腎不足型的年齡(40.00±9.17)最

18、大，濕熱痹阻型(27.33±10.69)最小，在各證型之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　10.2.2 肝腎不足型的病程(14.33±1.53)最長(zhǎng)，濕熱痹阻型(4.33±2.47)最短，病程在各證型之間有顯著性差異(P＜0.01)。
　　10.2.3 AS組骶髂關(guān)節(jié)X線分級(jí)在各證型之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　10.3 AS組中醫(yī)證型與ESR、CRP、BASDAI的關(guān)系各型中ESR、BASDAI

19、的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，而CRP的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　10.4 AS組中醫(yī)證型與IL-23、MIF水平的關(guān)系血清IL-23水平在各型中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，其中寒濕痹阻型(112.20±57.68)最高；血清MIF水平在各型中的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　10.5 AS組中醫(yī)證型與RANKL、OPG、DKK1、SOST的關(guān)系血清SOST水平在各型中的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P

20、＜0.05)，RANKL、OPG、DKK1水平在各型中差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.活動(dòng)性AS患者存在骨代謝異常，血清RANKL、OPG水平明顯升高；并且，隨著病程的延長(zhǎng)，新骨形成機(jī)制在關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)改變過(guò)程中發(fā)揮主要作用；IL-23、MIF可能通過(guò)介導(dǎo)炎癥反應(yīng)間接參與AS骨代謝。
　　2.活動(dòng)性AS患者血清DKK1和SOST水平與ESR、CRP、BASDAI、IL-23、MIF無(wú)相關(guān)性，可能獨(dú)立