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1、華中農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文粘紅酵母乙酰輔酶A羧化酶基因的克隆及表達(dá)姓名：李潔瓊申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：微生物學(xué)指導(dǎo)教師：喻子牛；鄭世學(xué)201106華中農(nóng)業(yè)大學(xué)201l屆碩：I：研究生學(xué)位論文AbstractAcetyl—CoAcarboxylase(ACC)isakeyenzymeoffattyacidsynthesisItcatalyzesacetyICoAtoformmalonyl—CoA，whichisusedasabuilding
2、blockintwocarbonincreasementstoextendthechainlengthoffattyacidsTherefore，ACCisalsoaratelimitingenzymeoffattyacidsynthesisThemainresultsareasfollowsinthestudy：UsingthemethodsofdegeneratePCRandchromosomewalking，thispaperob
3、tainedthefullsequenceinformationofACCgenefromRhodotorulaglutinisforthefirsttimeSequenceanalysisshowedthatACCgenefromgenomicDNAhavetwointrons，rangingfrom42to147and315to677nucleotides，andthecodingregionis6801bpinlengthSeco
4、ndarystructureanalysisofthededucedaminoacidsequencerevealedthatitcontainsthreetypicaldomainsofACC：biotincarboxylase(BC)，biotincarboxylcarrierprotein(BCCP)andcarboxyltransferase(C1)ACCfromRhodotorulaglutinisisanmulti—doma
5、inenzyme，anditsmonomermolecularweightisabove200kDIt’SverydifficulttoexpressfulllengtheDNAofACC，SOaccordingtomethodsforstudingmulti—subunitACC，thispaperdidresearchonthreedomainsofACCfromRhodotorulaglutinisThisstudyhadused
6、twoprokaryoticexpressionsystemspET28a／BL21(DE3)andpETDuet1／Transetta(DE3)toseparatedlyexpressandcoexpressthreedomaingenesFirstlynineexpreesionvectorsweresuccessfullyconstructedSDSPAGEanalysisrevealedthateachdomaingenewas
7、successfullyexpressedintwoexpressionsystemsMoreoverithadachievdtocoexpressBCandCTdomains，aswellasthreedomainsFattyacidofrecombinantstrail塔wasextractedbybathandanalyzedbyGaschromatographyResultssuggestedthatthefattyacidco
8、ntentofrecombinantstrainsinthesystempETDuet1／Transetta(DE3)，whichhadsepamtedlyexpressedBCorCTcoexpressedBCandCT，aswellasthreedomains，respectivelyincreased154％，2707％，35％，7062％comparedwiththecontrolgroupHoweveritdescreased
9、505％forexpressionofBCCPdomainInpET28a／BL21(DE3)expressionsystem，fattyacidcontentofrecombinantstraiilscompared、析nlthecontrolwithoutanyincreaseItdemonstratedthatthegeneshadachievdfunctionalexpressioninpETDuet1／Transetta(DE
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