超順磁性氧化鐵標記的自體骨髓間充質(zhì)干細胞在急性心梗環(huán)境中的分化研究.pdf

1、目的：初步探討超順磁性氧化鐵納米顆粒(SPIOs)標記的豬自體骨髓間充質(zhì)干細胞(MSCs)在急性心梗環(huán)境中向心肌樣細胞分化的能力，為進一步的活體動態(tài)示蹤奠定實驗基礎(chǔ)。 方法：抽取小型家豬骨髓10ml，F(xiàn)icoll淋巴細胞分離液梯度離心提取豬骨髓單個核細胞(BM-MNCs)，用含10％胎牛血清的低糖型DMEM液培養(yǎng)，超順磁性氧化鐵納米顆粒(SPIOs)標記，選擇左前降支(LAD)中遠三分之一交界處作為封堵部位，介入法制備豬急性心肌

2、梗死模型。12例成功制備的急性心梗模型豬隨機分為實驗組和對照組，各6例，1周后采用OTW導(dǎo)管經(jīng)冠狀動脈植入SPIOs標記的骨髓間充質(zhì)干細胞(對照組為生理鹽水)，4周后行核磁共振檢查以定位移植干細胞。處死實驗動物，于心肌梗死及周邊區(qū)取材固定，行普魯士藍染色及透射電鏡檢查，免疫組化染色檢測結(jié)蛋白(Desmin)、肌球蛋白重鏈(MHC)及CD68，病理圖文分析系統(tǒng)測定實驗組及對照組MHC、Desmin的表達量。 結(jié)果：磁共振成像(MR

3、I)顯示4周后實驗組心肌梗死周邊區(qū)存在點片狀模糊低信號區(qū)(T2*WI)，HE染色顯示梗死周邊區(qū)有細胞存活，普魯士藍染色表明細胞胞質(zhì)中含有鐵顆粒，免疫組化顯示細胞結(jié)蛋白(Desmin)、肌球蛋白重鏈(MHC)表達陽性，且與普魯士藍染色陽性區(qū)域基本一致，同時巨噬細胞特異性標記抗原CD68染色呈陰性。透射電鏡顯示部分移植細胞胞質(zhì)中富集超順磁性氧化鐵納米顆粒(SPIOs)，少數(shù)細胞有明顯的肌絲形成。病理圖文定量分析顯示移植組心肌梗死周邊區(qū)Des

4、min、MHC平均灰度值分別為79.55±6.55、105.93±9.25，對照組分別為98.52±7.23、135.50±8.71，移植組Desmin、MHC的表達量顯著高于對照組，差別具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。 結(jié)論：核磁共振成像是細胞示蹤理想的無創(chuàng)性影像手段，可對SPIOs標記的MSCs進行活體示蹤，其中尤以T2*WI最為敏感。采用SPIOs標記的MSCs在急性心梗環(huán)境中具備向心肌樣細胞分化的能力，該標記方法安全、有