參蓮提取物的血管作用及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的：參蓮提取物由丹參和穿心蓮組成，是以活血化瘀、清熱解毒為法組方用以預(yù)防、治療動(dòng)脈粥樣硬化的中藥復(fù)方提取物。本實(shí)驗(yàn)旨在研究參蓮提取物對(duì)離體家兔胸主動(dòng)脈條及胸主動(dòng)脈環(huán)的作用及其可能的機(jī)制，參蓮提取物及丹參的脂溶性成分對(duì)平滑肌細(xì)胞增殖的作用。
　　 方法：將家兔離體主動(dòng)脈條置于灌流肌槽中，記錄參蓮提取物對(duì)去甲腎上腺素(NE)、氯化鉀(KCl)、氯化鈣(CaCl2)誘導(dǎo)的主動(dòng)脈條收縮作用的影響，以及對(duì)NE誘導(dǎo)的主動(dòng)脈條細(xì)胞內(nèi)鈣及細(xì)胞

2、外鈣依賴(lài)性收縮反應(yīng)的影響；采用離體家兔胸主動(dòng)脈環(huán)灌流裝置，觀察去甲腎上腺素(PE)預(yù)收縮下，參蓮提取物對(duì)內(nèi)皮完整及去內(nèi)皮血管環(huán)的舒張作用。以NO清除劑Hemoglobin、亞甲藍(lán)(MB)、左旋硝基精氨酸甲酯鹽酸鹽(L-NAME)、甲基異硫脲硫酸鹽(SMT)及鉀通道阻斷劑四乙胺(TEA)和格列苯脲(GLB)預(yù)處理血管環(huán)，觀察對(duì)參蓮提取物內(nèi)皮舒張作用的影響。用SRB法檢測(cè)參蓮提取物對(duì)平滑肌細(xì)胞增殖反應(yīng)的影響。
　　 結(jié)果：參蓮提取物

3、200μg/mL、400μg/mL對(duì)NE所致收縮反應(yīng)無(wú)顯著拮抗效應(yīng)(P>0.05)；600μg/mL、800μg/mL、1mg/mL可使NE誘導(dǎo)的主動(dòng)脈條最大收縮反應(yīng)分別降低60.49％、59.94％、58.59％(P<0.01)，Ver可使最大反應(yīng)降低45.61％(P<0.05)。參蓮提取物200μg/mL、400μg/mL、600μg/mL、800μg/mL、1mg/mL可以使CaCl2誘導(dǎo)的主動(dòng)脈條最大收縮反應(yīng)分別降低23.01％

4、、40.31％、95.38％、109.5％、92.71％(P<0.01)，Ver可使最大反應(yīng)降低132.24％(P<0.01)，呈明顯非競(jìng)爭(zhēng)性拮抗效應(yīng)。參蓮提取物200μg/mL對(duì)KCL所致收縮反應(yīng)無(wú)顯著拮抗作用，400μg/mL、600μg/mL、800μg/mL、1mg/mL可以使KCL誘導(dǎo)的主動(dòng)脈條最大收縮反應(yīng)分別降低27.4％、37.18、55.14％、38.98％(P<0.01)，Ver可使最大收縮反應(yīng)降低61.11％(P<0

5、.01)。參蓮提取物對(duì)NE誘發(fā)主動(dòng)脈條細(xì)胞內(nèi)鈣依賴(lài)性收縮反應(yīng)除800μg/mL(P<0.05)外均無(wú)明顯抑制作用(P>0.05)，但對(duì)NE誘發(fā)細(xì)胞外鈣依賴(lài)性收縮有顯著抑制作用(P<0.01)。Ver能明顯抑制細(xì)胞外Ca2+內(nèi)流引起的收縮反應(yīng)(P<0.01)，對(duì)細(xì)胞內(nèi)Ca2+釋放引起的收縮反應(yīng)無(wú)明顯影響。
　　 參蓮提取物對(duì)家兔胸主動(dòng)脈環(huán)舒張作用的研究：參蓮提取物在200μg/mL-1.4mg/mL時(shí)對(duì)內(nèi)皮完整及去內(nèi)皮的大鼠胸主動(dòng)

6、脈環(huán)均具有濃度依賴(lài)性舒張作用(P<.0.01)：內(nèi)皮完整的血管環(huán)，最大舒張率達(dá)220.90％，；去內(nèi)皮的血管環(huán)，最大舒張率達(dá)98.48％；在200μg/mL-800μg/mL時(shí)與完整內(nèi)皮時(shí)的作用相似，從1mg/mL-1.4mg/mL內(nèi)皮完整的血管環(huán)的舒張作用略高于去內(nèi)皮血管環(huán)的舒張作用，但差異不顯著(P>0.05)。參蓮提取物的血管舒張反應(yīng)不被Hemoglobin和亞甲藍(lán)所阻斷(P>0.05)。經(jīng)NOS抑制劑孵育后，參蓮提取物的血管舒張

7、反應(yīng)被抑制(P<0.05)。在PE預(yù)收縮的血管環(huán)上，鉀通道阻斷劑GLI對(duì)參蓮提取物的血管舒張作用的抑制作用不明顯(P>0.05)，鈣離子激活鉀通道阻斷劑TEA可抑制參蓮提取物的擴(kuò)血管作用(P<0.05)
　　 SRB法測(cè)定參蓮提取物對(duì)血管平滑肌細(xì)胞增殖的作用：參蓮方對(duì)HUASMC的A值測(cè)定：對(duì)于HUASMC細(xì)胞，24h-72h時(shí)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比，細(xì)胞生長(zhǎng)受抑制的差異顯著(P<0.01)，500μg/mL與250μg/mL、12

8、5μg/mL之間無(wú)顯著差別(P>0.05)。丹參脂溶性成分對(duì)HUASMC三個(gè)時(shí)間點(diǎn)的A值測(cè)定。24h-72h時(shí)，對(duì)于HUASMC細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比，細(xì)胞生長(zhǎng)受抑制的差異顯著(P<0.01)。
　　 結(jié)論：參蓮提取物既對(duì)PDC類(lèi)Ca2+通道可能有明顯影響，又能通過(guò)非競(jìng)爭(zhēng)性拮抗ROC類(lèi)Ca2+通道開(kāi)放影響主動(dòng)脈條收縮，即參蓮提取物對(duì)PDC和ROC有雙重抑制作用。同時(shí)，還可能通過(guò)影響細(xì)胞外Ca2+內(nèi)流從而影響主動(dòng)脈條收縮。參蓮提