攻下逐瘀法治療出血性中風(fēng)的作用機(jī)制研究.pdf

1、目的
　　 整理總結(jié)歷代主要醫(yī)家對(duì)出血性中風(fēng)病因病機(jī)的論述,闡述抵當(dāng)湯治療出血性中風(fēng)的依據(jù),論證抵當(dāng)湯治療出血性中風(fēng)的合理性和科學(xué)性。并在既往對(duì)腦出血模型研究的基礎(chǔ)上,結(jié)合出血性中風(fēng)急性期的病機(jī)特點(diǎn),研制高血壓腦出血瘀熱證模型,從行為學(xué)、證候相關(guān)指標(biāo)、微觀指標(biāo)等角度對(duì)模型進(jìn)行評(píng)價(jià);并觀察抵當(dāng)湯對(duì)該模型的影響,探討抵當(dāng)湯治療急性高血壓腦出血瘀熱證可能作用機(jī)制,為攻下逐瘀法治療高血壓腦出血瘀熱證提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法

2、r>　　 本研究分為理論和實(shí)驗(yàn)研究?jī)刹糠帧?br>　　 理論部分:通過(guò)查閱古籍文獻(xiàn)、參考現(xiàn)今醫(yī)家論述以及發(fā)表刊物,整理總結(jié)古今醫(yī)家對(duì)出血性中風(fēng)的防治觀點(diǎn),并闡述攻下逐瘀治療出血性中風(fēng)的依據(jù)。
　　 實(shí)驗(yàn)部分:采用改良二腎一夾法建立大鼠腎性高血壓模型。在高血壓模型成功復(fù)制后,腹腔注射內(nèi)毒素(LPS),腦立體定位注入膠原酶,復(fù)制腦出血大鼠模型。然后分別應(yīng)用抵當(dāng)湯及其拆方桃仁大黃、水蛭虻蟲(chóng)治療一周。觀察各組大鼠一般情況、血壓、神經(jīng)

3、功能評(píng)分(Bederson、LongaEZ、平衡實(shí)驗(yàn))、病理學(xué)改變,檢測(cè)血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、腦血腫周?chē)M織Na+-K+-ATP酶、白細(xì)胞介素-8(IL-8)、蛋白C、神經(jīng)細(xì)胞粘附因子-1(ICAM-1)、凝血酶原酶-2(FGL-2)、血紅素加氧酶-1(HO-1)、促血管生成素-1(Ang-1)含量。
　　 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)方法,數(shù)據(jù)以-x±s表示,計(jì)量資料采用單因素方差分析,

4、兩組組間比較采用t檢驗(yàn),多組間比較用方差分析F檢驗(yàn)。方差齊則用LSD-t法,方差不齊用Dunnett-t法。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α為0.05(方差齊性檢驗(yàn)α為0.10)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 結(jié)果
　　 理論研究:
　　 采用具有攻下逐瘀功效的抵當(dāng)湯治療出血性中風(fēng)是可行的和科學(xué)的,有其運(yùn)用依據(jù)。
　　 實(shí)驗(yàn)研究:
　　 模型的建立和評(píng)價(jià):
　　 一般情況:模型組大鼠出現(xiàn)飲食物減少、不

5、喜動(dòng)、結(jié)膜充血、走路不穩(wěn)、肢體軟弱無(wú)力或偏癱,甚至死亡等癥狀;假手術(shù)組大鼠精神、活動(dòng)、飲食等無(wú)明顯變化。血壓:模型組大鼠血壓升高,同假手術(shù)組相比,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。
　　 神經(jīng)功能評(píng)分1d:Bederson評(píng)分:模型組大鼠評(píng)分2.22分左右,假手術(shù)組評(píng)分為0分,兩組相比,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。LongaEZ評(píng)分:模型組評(píng)分在1.72分左右,假手術(shù)組評(píng)分0分,兩組相比,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。平衡實(shí)驗(yàn):模

6、型組評(píng)分在4.28分左右,假手術(shù)組評(píng)分在1.71分左右,兩組相比,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。
　　 病理學(xué)觀察:光鏡下模型組可見(jiàn)出血區(qū)大量紅細(xì)胞漏出,組織染色較淺,腦組織可見(jiàn)紅細(xì)胞、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),腦組織細(xì)胞間隙變大,血腫周?chē)M織疏松、軟化、變性壞死甚至消失,染色較淺,較多紅細(xì)胞、白細(xì)胞浸潤(rùn),并可見(jiàn)腦組織細(xì)胞間隙變大,細(xì)胞腫脹,血腫周?chē)梢?jiàn)較多含鐵血黃素沉積;假手術(shù)組織間隙較緊密,紅細(xì)胞散布,未見(jiàn)明顯炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。
　　

7、 生化檢測(cè):模型組SOD活力降低而MDA含量增高,Na+-K+-ATP酶活力降低,同假手術(shù)組相比,均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。
　　 免疫組織化學(xué):IL-8,ICAM-1,FGL-2,模型組均出現(xiàn)較多的陽(yáng)性細(xì)胞,假手術(shù)組僅見(jiàn)少量陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá),兩組相比,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均為P＜0.05);蛋白C,模型組均出現(xiàn)較少的陽(yáng)性反應(yīng)細(xì)胞,假手術(shù)組較多陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá),兩組相比,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均為P＜0.05)。
　　 Western

8、blot免疫印跡測(cè)定:HO-1、Ang-1表達(dá),模型組表達(dá)降低,與假手術(shù)組相比,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。
　　 抵當(dāng)湯及其拆方治療:
　　 各治療組大鼠血壓,同模型組相比,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　 神經(jīng)功能評(píng)分7d:Bederson評(píng)分:全方組大鼠評(píng)分1.54分左右,大黃桃仁組1.42分左右,與模型組相比,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。LongaEZ評(píng)分:大黃桃仁組評(píng)分在1.08分左右,與模型組

9、相比,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。平衡實(shí)驗(yàn):大黃桃仁組得分在3.67分左右,與模型組相比,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。
　　 病理學(xué)觀察:全方組腦組織細(xì)胞間隙變大,出血區(qū)域含鐵血黃素沉積,紅細(xì)胞、白細(xì)胞浸潤(rùn):大黃桃仁組出血區(qū)域較多含鐵血黃素沉積,紅細(xì)胞、白細(xì)胞浸潤(rùn),腦組織細(xì)胞間隙較全方組變大;水蛭虻蟲(chóng)組出血區(qū)域含鐵血黃素散在沉積,較少紅細(xì)胞、白細(xì)胞浸潤(rùn),腦組織細(xì)胞間隙變大,但較全方組小。
　　 生化檢測(cè):各治療組SO

10、D活力、Na+-K+-ATP酶含量升高而MDA含量降低,與模型組相比,各治療組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。
　　 免疫組織化學(xué):IL-8,各治療組陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)減少,與模型組相比,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。ICAM-1,全方組表達(dá)減少,水蛭虻蟲(chóng)組表達(dá)增高,兩組與模型組相比,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。大黃桃仁組,與模型組相比,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。蛋白C,各治療組陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)增高,與模型組相比,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜

11、0.05)。FGL-2,各治療組陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)降低,與模型組相比,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。
　　 Westernblot免疫印跡測(cè)定:HO-1,全方組表達(dá)增高,與模型組相比,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。大黃桃仁組、水蛭虻蟲(chóng)組與模型組相比,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。Ang-1的表達(dá),全方組、大黃桃仁組表達(dá)增高,與模型組相比,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05),水蛭虻蟲(chóng)組與模型組相比,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。結(jié)論
　

12、　 采用抵當(dāng)湯治療出血性中風(fēng),具有理論、臨床、實(shí)驗(yàn)上的依據(jù),可以用來(lái)治療出血性中風(fēng)。
　　 實(shí)驗(yàn)采用腎動(dòng)脈結(jié)扎狹窄、腹腔注射內(nèi)毒素LPS、腦內(nèi)注入膠原酶多因素復(fù)制大鼠高血壓腦出血瘀熱證模型,該模型的形成過(guò)程與臨床腦出血發(fā)生、發(fā)展過(guò)程接近,組織病理學(xué)觀察、神經(jīng)功能評(píng)估、生化、免疫組化指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果表明該模型能夠部分模擬高血壓腦出血發(fā)病特點(diǎn),利用腦立體定位技術(shù)、內(nèi)毒素、膠原酶腦內(nèi)注入法多因素復(fù)合可成功制作大鼠高血壓腦出血瘀熱證模型。

13、
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,采用抵當(dāng)湯及其拆方對(duì)高血壓腦出血瘀熱證的治療作用可能是通過(guò)提高SOD含量、Na+-K+-ATP酶活力,降低MDA含量,減輕氧化還原反應(yīng)中自由基對(duì)機(jī)體的損傷,改善腦組織供能;抑制FGL-2的表達(dá),促進(jìn)蛋白C表達(dá),改善血液凝血和抗凝系統(tǒng)紊亂;下調(diào)IL-8、ICAM-1等炎癥介質(zhì)產(chǎn)生、釋放,減輕或中斷炎癥連鎖反應(yīng);促進(jìn)HO-1、Ang-1表達(dá),切斷含鐵血紅素介導(dǎo)的氧化應(yīng)激反應(yīng),促進(jìn)血管增生,達(dá)到減少細(xì)胞凋亡、神經(jīng)