補(bǔ)腎醒腦法對2型糖尿病認(rèn)知功能障礙小鼠性激素信號通路相關(guān)激素水平、海馬Erα和ErβmRNA的影響研究.pdf

1、本論文分為2型糖尿病(Type2Diabetes Mellitus T2DM)認(rèn)知功能障礙與性激素信號通路相關(guān)性的理論探討和科學(xué)研究兩部分。
　　第一部分 理論探討
　　從祖國醫(yī)學(xué)的角度出發(fā)，結(jié)合導(dǎo)師觀點(diǎn)和自身研究，對消渴呆?。ㄌ悄虿≌J(rèn)知功能障礙）的定義、病因病機(jī)、辨證論治和現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究進(jìn)行簡要闡述。
　　第二部分 科學(xué)研究
　　目的：研究2型糖尿病小鼠性激素信號通路中下丘腦-垂體-性腺軸（Hypothalami

2、c-pituitary-gonadal axisHPG）中相關(guān)激素水平、海馬中Erα和ErβmRNA水平的表達(dá)，進(jìn)而明確補(bǔ)腎醒腦法改善2型糖尿病認(rèn)知功能障礙小鼠的認(rèn)知能力與其對性激素信號通路某些環(huán)節(jié)的調(diào)控的相關(guān)性。
　　方法：健康清潔級雌性8周齡昆明小鼠，為正常對照組；健康SPF級（specific pathogen free無特定病原體級）雌性8周齡KKay小鼠為實(shí)驗(yàn)組。KKay小鼠，經(jīng)去勢手術(shù)和糖尿病認(rèn)知功能障礙成模檢測成功后

3、隨機(jī)分為模型對照組、陽性對照組、中藥組和中藥去勢組（中藥去勢組先行去卵巢手術(shù)）。陽性對照組予吡拉西坦；中藥組、中藥去勢組予醒腦益智合劑；KKay小鼠糖尿病造模成功后均予羅格列酮常規(guī)控制血糖。給藥周期共計(jì)8周。在糖尿病成模后和給藥結(jié)束后分別各進(jìn)行一次Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)。第二次水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，及時于冰上進(jìn)行實(shí)驗(yàn)動物解剖及樣本制備。酶聯(lián)免疫分析法(Enzyme linked immunosorbent assay ELISA)檢測各組小

4、鼠相關(guān)性激素水平；實(shí)時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Quantitative Real-timePolymerase Chain ReactionQRT-PCR）測定海馬中雌激素受體1(Estrogen receptorErα)和雌激素受體2(Estrogen receptor Erβ)mRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果:（1）第一次水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果中正常對照組和各組糖尿病小鼠平臺潛伏期比較，各組均明顯偏高（P＜0.05），可見T2DM小鼠認(rèn)知能

5、力顯著低于正常小鼠。去卵巢后小鼠和其他各組小鼠比較P<0.05，說明去勢后急速衰老的T2DM小鼠認(rèn)知能力顯著低于正常小鼠和壯年的T2DM小鼠。第二次水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果中正常對照組和模型對照組、中藥去勢組的小鼠比較P<0.05，說明這兩組的認(rèn)知能力顯著低于正常對照組。給藥前后比較：中藥去勢組、陽性對照組和中藥組水迷宮成績第二次都明顯好于第一次（P<0.05），即經(jīng)吡拉西坦治療后T2DM小鼠和醒腦益智合劑治療后的T2DM小鼠、去勢的T2DM小鼠

6、認(rèn)知能力均明顯提高。
　?。?）在HPG軸性激素水平研究中發(fā)現(xiàn)：模型對照組E2、P水平顯著低于正常組（P＜0.05）。模型對照組、陽性對照組、中藥去勢組的LH、FSH、PRL水平顯著高于正常組（P＜0.05），說明T2DM KKay小鼠、陽性對照組和急速衰老T2DM KKay小鼠的LH、FSH、PRL出現(xiàn)紊亂。而T的變化不大，沒有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在經(jīng)過醒腦益智合劑治療后中藥組E2、P顯著高于模型對照組（P＜0.05）。中藥組和正常

7、對照組，中藥去勢組與模型組E2、P、LH、FSH比較時P＞0.05，沒有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，這說明使用醒腦益智合劑治療2型糖尿病認(rèn)知功能障礙KKay小鼠和其急速衰老小鼠模型是有效的，能調(diào)節(jié)HPG軸性激素的紊亂，糾正E2、P的低水平，降低LH、FSH的過高水平。
　?。?）在小鼠海馬Erα和ErβmRNA的表達(dá)研究中：T2DM KKay小鼠和去勢的T2DM KKay小鼠Erα和ErβmRNA表達(dá)顯著低于正常水平（P＜0.05）；模型對照

8、組和中藥組比較P＜0.05，有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，模型對照組和中藥去勢組比較P＞0.05，沒有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，說明經(jīng)醒腦益智合劑治療T2DM KKay小鼠和去勢T2DM KKay小鼠Erα和ErβmRNA表達(dá)能有所提高。中藥治療后T2DM KKay小鼠的Erα和ErβmRNA表達(dá)顯著高于模型對照組；治療后去勢T2DM KKay小鼠Erα和ErβmRNA表達(dá)升高接近模型對照組。陽性對照組和中藥去勢組、模型對照組ErαmRNA表達(dá)比較P＜0.0

9、5，有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，說明吡拉西坦對小鼠ErαmRNA表達(dá)有一定影響，使ErαmRNA表達(dá)在一定程度上升高。模型對照組和陽性對照組ErβmRNA比較P＞0.05，沒有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，說明吡拉西坦對T2DM小鼠ErβmRNA表達(dá)影響不大。
　　結(jié)論:在常規(guī)控制血糖的基礎(chǔ)上，醒腦益智合劑能有效提高T2DM認(rèn)知功能障礙小鼠和去勢后急速衰老的T2DM認(rèn)知功能障礙小鼠的學(xué)習(xí)、記憶能力，其可能的作用機(jī)制可能是通過調(diào)整HPG性激素的水平，升高E