阿奇霉素通過基質(zhì)金屬蛋白酶9抑制氣道黏液高分泌的研究.pdf

1、目的:探討阿奇霉素(AZT)通過基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP9)抑制氣道黏液高分泌的作用機制。
　　 方法(1)培養(yǎng)人支氣管上皮細胞株HBE16細胞,以中性粒細胞彈性蛋白酶(NE)為刺激物,AZT和表皮生長因子受體(EGFR)拮抗劑BIBX1522為干擾因素,將細胞分為對照組、NE刺激組、AZT干預+NE刺激組和BIBX1522干預+NE刺激組。運用Western blot檢測細胞中MMP9、TIMP-1和pro-MMP9蛋白含量;

2、明膠酶譜法檢測培養(yǎng)細胞內(nèi)MMP9活性。(2)運用RT-PCR檢測各組細胞中MMP9mRNA;Western blot法檢測細胞中p-EGFR和p-ERK。(3)ELISA檢測培養(yǎng)細胞上清液中的MUC5AC蛋白含量;用RT-PCR檢測細胞內(nèi)MUC5AC mRNA。
　　 結(jié)果(1)與對照組相比,NE刺激組中MMP9的蛋白表達水平、MMP9的活性指標升高(均P＜0.01),而pro-MMP9蛋白含量降低(P＜0.01),TIMP-1

3、含量未見明顯改變;與NE刺激組相比,AZT干預+NE刺激組中MMP9的蛋白表達水平與MMP9活性降低(均P＜0.01),pro-MMP9和TIMP-1蛋白含量升高(均P＜0.05);與NE刺激組相比,BIBX1522干預+NE刺激組中各項檢驗指標無明顯改變,差異無統(tǒng)計學意義。(2)同對照組比較,NE刺激組中MMP9的基因轉(zhuǎn)錄明顯升高(P＜0.01),p-EGFR和p-ERK的蛋白表達水平升高(均P＜0.01);與NE刺激組比較,AZT干

4、預+NE刺激組中MMP9的基因轉(zhuǎn)錄水平明顯降低(P＜0.01),p-EGFR的蛋白表達未見明顯降低,而p-ERK蛋白表達水平降低了(P＜0.01);同NE刺激組相比,BIBX1522干預+NE刺激組中MMP9 mRNA、p-EGFR和p-ERK明顯降低(均P＜0.01)。(3)和對照組相比,NE刺激組中MUC5AC的基因轉(zhuǎn)錄和蛋白表達水平明顯升高(均P＜0.01);與NE刺激組相比,AZT干預+NE刺激組中MUC5AC基因轉(zhuǎn)錄與蛋白表達

5、水平明顯降低(均P＜0.01);跟NE刺激組相比,BIBX1522干預+NE刺激組MUC5AC mRNA明顯降低(P＜0.01),MUC5AC蛋白表達水平無明顯改變,差異無統(tǒng)計學意義。
　　 結(jié)論(1)AZT可抑制氣道上皮細胞內(nèi)NE刺激的pro-MMP9活化,并增加MMP9抑制因子TIMP-1的表達,從而抑制MMP9的活性。(2)AZT能調(diào)控EGFR/ERK1/2信號通路,抑制額外的MMP9的產(chǎn)生。(3)AZT具有抑制氣道黏液高