自行制備的HPV6b和11型E7蛋白多克隆抗體對(duì)尖銳濕疣皮損的檢測(cè)及意義.pdf

1、尖銳濕疣(CA)是由人乳頭瘤病毒(HPV)引起的一種常見(jiàn)性傳播疾病，該病對(duì)患者的身心健康、生殖健康和家庭幸福造成較大的危害。超過(guò)90％的外生殖器疣與低危型HPV6和11兩種亞型有關(guān)。近年來(lái)尖銳濕疣發(fā)病率不斷上升，其中亞臨床感染和潛伏感染遠(yuǎn)多于典型尖銳濕疣，且HPV亞臨床和潛伏感染者也具有傳染性，對(duì)尖銳濕疣的流行、傳播、病程以及轉(zhuǎn)歸有一定的影響。臨床工作中亟需一種操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確度高的檢測(cè)方法。然而目前HPV的臨床檢測(cè)手段不盡理想，尖銳濕疣

2、診斷，尤其在HPV亞臨床和潛伏感染的診斷缺乏便捷而準(zhǔn)確的方法，易造成誤診與漏診。HPV病原學(xué)檢測(cè)如核酸分子技術(shù)，因?qū)嶒?yàn)室要求高等原因，無(wú)法在臨床尤其基層醫(yī)院作為常規(guī)檢驗(yàn)項(xiàng)目開(kāi)展。曾有研究用HPV殼蛋白L1抗體免疫組化檢測(cè)HPV感染，發(fā)現(xiàn)其陽(yáng)性檢出率較低而未能應(yīng)用于臨床診斷。本研究評(píng)估了自主研發(fā)的HPV6b和11型E7蛋白多克隆抗體對(duì)尖銳濕疣皮損HPV感染的檢測(cè)意義和臨床應(yīng)用可能性。
　　目的：
　　采用自行制備的HPV6b和

3、11型E7蛋白多克隆抗體，檢測(cè)外生殖器尖銳濕疣皮損組織中HPV6b和11型E7蛋白的表達(dá)，觀(guān)察與尖銳濕疣臨床診斷及RT-PCR檢測(cè)結(jié)果的符合率，探討該兩型抗體在臨床HPV檢測(cè)中的應(yīng)用價(jià)值。
　　方法：
　　1.收集2013年9月至2014年10月間在杭州市富陽(yáng)區(qū)第一人民醫(yī)院皮膚科確診的尖銳濕疣病例55例。常規(guī)消毒，局麻下用血管鉗夾取全部或部分疣體組織標(biāo)本，經(jīng)生理氯化鈉溶液沖洗，置入10％福爾馬林中固定，常規(guī)組織病理檢查，HE

4、染色。其中18例患者同時(shí)取疣體組織-80℃冰凍保存。
　　2.55例尖銳濕疣皮損石蠟標(biāo)本，用HPV6b和11型E7蛋白多克隆抗體進(jìn)行免疫組化法染色檢測(cè)。鏡下觀(guān)察細(xì)胞染色情況，分析陽(yáng)性染色的細(xì)胞中定位、染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞百分比。
　　3.18例尖銳濕疣皮損冰凍標(biāo)本用RT-PCR法測(cè)定HPV6b、11E7蛋白的mRNA表達(dá)情況，分析與免疫組化結(jié)果的符合率。
　　結(jié)果：
　　55例尖銳濕疣皮損的免疫組化染色顯示HPV6

5、b和11E7蛋白為胞核染色，而且皮損全層表皮細(xì)胞均可見(jiàn)陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞，但以基底層較多。其中HPV6b E7和HPV11 E7蛋白陽(yáng)性表達(dá)病例分別為42例（陽(yáng)性率76.36％）和32例(陽(yáng)性率58.18％)。HPV6b型和11型E7蛋白總陽(yáng)性表達(dá)病例為52例(總陽(yáng)性檢出率94.55％)，其中兩蛋白雙陽(yáng)性表達(dá)22例（雙陽(yáng)性率40.00％）。兩蛋白均陰性表達(dá)為3例（陰性率5.45％）。42例HPV6b E7陽(yáng)性表達(dá)病例中有20例為HPV11 E

6、7表達(dá)陰性;32例HPV11E7陽(yáng)性表達(dá)病例中有10例為HPV6bE7表達(dá)陰性。18例尖銳濕疣冰凍標(biāo)本經(jīng)RT-PCR法檢測(cè)，HPV6bE7和HPV11E7的mRNA表達(dá)陽(yáng)性分別為15例和10例，雙陽(yáng)性表達(dá)7例。陽(yáng)性表達(dá)型別與免疫組化結(jié)果完全一致。
　　討論：
　　用自行制備的HPV6b和11型E7蛋白多克隆抗體免疫組化檢測(cè)55例CA標(biāo)本，可以直觀(guān)地觀(guān)察到HPV6b和11型E7蛋白陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞散在分布于皮損表皮各層，且主要為胞

7、核染色。HPV6b和11 E7的總陽(yáng)性檢出率達(dá)94.55％，明顯高于HPV殼抗原免疫組化陽(yáng)性檢出率，并與文獻(xiàn)報(bào)道的超過(guò)90％的尖銳濕疣由低危型HPV6和11兩種亞型感染所致的流行病學(xué)結(jié)論相符合。本研究提示，自行制備的HPV6b和11型E7蛋白多克隆抗體免疫組化檢測(cè)尖銳濕疣標(biāo)本的陽(yáng)性率很高。用這兩型HPV E7抗體進(jìn)行的免疫組化檢測(cè)還發(fā)現(xiàn)，HPV11型E7陽(yáng)性表達(dá)的組織中僅部分表現(xiàn)為HPV6b型E7表達(dá)陽(yáng)性，反之亦然。提示該兩型抗體間無(wú)交

8、叉反應(yīng)。對(duì)其中18例患者皮損組織平行進(jìn)行HPV6b和11型的E7 mRNA的RT-PCR法檢測(cè)，研究表明其陽(yáng)性檢出率及陽(yáng)性表達(dá)型別與免疫組化的結(jié)果完全一致，提示該兩型抗體對(duì)尖銳濕疣皮損組織中HPV6b、11的免疫組化法檢測(cè)型特異性很強(qiáng)。
　　結(jié)論：
　　該自行制備的HPV6b和11型E7蛋白多克隆抗體對(duì)尖銳濕疣皮損中HPV6b和11型感染檢出率很高，敏感性好，特異性強(qiáng)。未發(fā)現(xiàn)兩抗體有交叉反應(yīng)，且可以直觀(guān)地觀(guān)察病損組織中HPV