三種大蒜病毒六安分離物CP基因克隆及檢測(cè)試劑盒的研制.pdf

1、大蒜病毒病害是造成大蒜產(chǎn)量損失和品質(zhì)下降的重要原因，每年因大蒜病毒造成的損失巨大。近年來(lái)，隨著各國(guó)間貿(mào)易往來(lái)的日趨頻繁，使得大蒜病毒在全球范圍大面積傳播，給大蒜生產(chǎn)帶來(lái)了巨大的危害。侵染大蒜的植物病毒主要包括香石竹潛隱病毒屬(Carlavirus)的蔥潛隱病毒(Shallot latent virus, SLV)、大蒜普通潛隱病毒(Garlic common latent virus, GarCLV)，馬鈴薯X病毒屬(Potxvirus

2、)的燕X病毒(Scallion visus x, ScaVX)，馬鈴薯Y病毒屬(Potyvirus)的洋蔥黃矮病毒(Onion yellow dwarf virus, OYDV)、韭蔥黃條病毒(Leek yellow stripe virus, LYMV)，以及蔥屬X病毒屬(Allexivirus)的大蒜A病毒(Garlic virus A, GarV-A)、大蒜B病毒(Garlic virus B，GarV-B)、大蒜C病毒(Garl

3、ic virus C，GarV-C)、大蒜D病毒(Garlic virus D，GarV-D)、大蒜E病毒(Garlic virus E, GarV-E)和大蒜X病毒(Garlic virus X, GarVX)。
　　 從六安市金安區(qū)采集有明顯花葉或斑駁癥狀的大蒜新鮮葉，提取總RNA并合成cDNA。根據(jù)已報(bào)道的大蒜X病毒(Garlic virus X，GarVX)、韭蔥黃條病毒(LYSV)序列和洋蔥黃矮病毒(OYDV)序列設(shè)計(jì)

4、特異引物，分別擴(kuò)增GarVX、LYSV和OYDV的全長(zhǎng)外殼蛋白(CP)基因。將GarVX、LYSV和OYDV的全長(zhǎng)外殼蛋白(CP)基因插入原核表達(dá)載體pSBET后在大腸桿菌BL21(DE3) plys S中誘導(dǎo)表達(dá)。通過(guò)12％SDS-PAGE和5％-20％梯度SDS-PAGE二次制備電泳純化誘導(dǎo)產(chǎn)物，免疫小鼠， 獲得經(jīng)過(guò)Western blot分析為特異的抗CP血清。硫酸銨沉淀法與Protein A-Red Sepharose 親和層析