Th17細(xì)胞及IL-17與糖尿病腎病的關(guān)系.pdf

1、目的：
　　 (1)制備SD大鼠的糖尿病腎病(diabetic nephropathy，DN)模型，檢測Th17細(xì)胞亞群數(shù)量及IL-17的表達(dá)水平，探討Th17細(xì)胞及IL-17在DN發(fā)病中的作用和DN的免疫炎癥機(jī)制；
　　 (2)開展以醫(yī)院為基礎(chǔ)的病例對照研究，從細(xì)胞因子分泌水平和轉(zhuǎn)錄調(diào)控水平層面探討IL-17與DN的關(guān)系，并在環(huán)境-行為-遺傳-免疫因素的多變量模式下，探討IL-17與2型糖尿病(type2 diabet

2、es mellitus，T2DM)患者繼發(fā)DN的關(guān)系，篩選T2DM繼發(fā)DN及DN分期的預(yù)測因子。為探尋DN的炎性標(biāo)志物，豐富和完善DM及其慢性并發(fā)癥的“炎性學(xué)說”，開發(fā)針對Th17細(xì)胞的靶向免疫治療提供參考；并為DN的早期預(yù)測、易感人群篩選以及開展有針對性的健康干預(yù)提供一定的理論依據(jù)。
　　 方法：
　　 (1)動物實(shí)驗(yàn)：尾靜脈注射鏈脲佐菌素(STZ)制備DN大鼠模型。造模成功的大鼠按血糖和體重分層后，隨機(jī)分為金芪治療組

3、、胰島素治療組和模型組，另選取正常大鼠作為對照。采用流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測各組外周血單核細(xì)胞(PBMCs)表面IL-23R+CD4+/CD4+比例，以了解Th17細(xì)胞的相對數(shù)量。采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(EIASA)檢測各組血漿IL-23、IL-17的水平；光鏡和電鏡下觀察各組大鼠腎臟病理組織學(xué)改變。通過免疫組化法檢測大鼠腎皮質(zhì)內(nèi)TNF-α、TGF-β1和IL-17的表達(dá)。
　　 (2)以醫(yī)院為基礎(chǔ)的病例對照研究：研究對象共包括4

4、87名T2DM患者，其中病例組(DN)170人，對照組(未患DN的T2DM患者)317人。問卷調(diào)查研究對象的一般人口學(xué)信息、現(xiàn)病史、家族史、生活方式和行為習(xí)慣等項(xiàng)目，同時進(jìn)行體格檢查和實(shí)驗(yàn)室檢查；采用ELISA檢測血漿IL-17的水平；采用RT-PCR技術(shù)檢測外周血中IL-17 mRNA的表達(dá)水平。采用非條件Logistic回歸模型、有序資料的累積Logit模型篩選DN及DN分期的危險因素，構(gòu)建基于環(huán)境-行為-遺傳-免疫因素的多變量預(yù)測

5、模型。
　　 結(jié)果：
　　 (1)動物實(shí)驗(yàn)：成功建立了STZ誘導(dǎo)的DN大鼠模型，實(shí)驗(yàn)過程中各組大鼠胰島功能未出現(xiàn)自發(fā)性恢復(fù)。模型組大鼠的尿微量白蛋白排出量高于正常對照組，成模18周時SD大鼠已經(jīng)出現(xiàn)了DN的早期臨床表現(xiàn)。外周血中IL-23R+CD4+/CD4+比例、血漿IL-17、IL-23水平在DM組中高于對照組，DN大鼠腎皮質(zhì)中IL-17亦存在高表達(dá)。Th17細(xì)胞及炎性因子IL-17、IL-23對尿微量白蛋白產(chǎn)生正向

6、影響。DN大鼠腎皮質(zhì)TGF-β1和TNF-α表達(dá)量均高于正常對照組。TGF-β、TNF-α表達(dá)水平與血漿IL-23R+CD4+/CD4+細(xì)胞比例呈正相關(guān)，與血漿IL-17濃度、腎臟IL-17表達(dá)水平亦存在正相關(guān)。提示Th17細(xì)胞分化及其參與的炎性反應(yīng)過程可能與DN的進(jìn)展有關(guān)。
　　 (2)以醫(yī)院為基礎(chǔ)的病例對照研究：血漿IL-17水平、外周血IL-17mRNA表達(dá)水平在臨床白蛋白尿組最高，其次是微量白蛋白尿組，正常白蛋白尿組最低