尼可地爾預處理對大鼠心肌缺血再灌注氧化應激及炎性因子影響的研究.pdf

1、目的：心肌缺血（myocardial ischemia, MI）是一種病理狀態(tài)，由于冠狀動脈狹窄等原因，心臟的血液灌注減少，進而心肌出現(xiàn)供血供氧的不足及代謝產(chǎn)物的清除減少。當前盡快地恢復缺血區(qū)心肌的血液供應，達到心肌再灌注治療是我們普遍采取的主要方法。但再灌注在改善缺血缺氧、拯救瀕死心肌的同時，還可出現(xiàn)心肌缺血再灌注損傷（myocardial ischemia reperfusion injury, MIRI）。而探索MIRI的機制和尋

2、求避免或減輕MIRI的方法已然成為了心血管研究領(lǐng)域的熱點問題。ATP敏感性鉀離子通道（ATP-sensitive potassium channel, KATPC）開放劑，在防治MIRI研究中具有較好的心臟保護功能。本研究通過建立大鼠心肌缺血-再灌注（ ischemia-reperfusion, I/R）的動物模型，選用代表性的心臟非選擇性KATPC開放劑尼可地爾，于術(shù)前進行干預，觀察尼可地爾是否存在減輕再灌注損傷的作用，并探討其抗氧化

3、應激、減輕炎癥反應的變化，為其在防治MIRI的臨床應用上提供新的理論依據(jù)和治療思路。
　　方法：
　　選取健康的成年雄性SD（Sprague Dawley）大鼠48只，隨機分為3組（每組16只）：①假手術(shù)組（Sham組）、②缺血再灌注組（I/R組）、③尼可地爾組（Nic組）。適應性喂養(yǎng)大鼠3天后，Nic組給予尼可地爾（生產(chǎn)廠家：北京四環(huán)科寶制藥有限公司）1mg/（kg.d），經(jīng)尾靜脈注射給藥，每間隔24小時重復給藥一次，連續(xù)

4、1周；Sham組、I/R組則給予等量生理鹽水尾靜脈注射，每間隔24小時重復給生理鹽水一次，連續(xù)1周。第八日手術(shù)，術(shù)前半小時Nic組再次追加一天劑量藥物，Sham組、I/R組則給等量的生理鹽水，手術(shù)時，Sham組開胸后行左冠狀動脈前降支（left anterior descending coronary artery, LAD）下穿線，不進行結(jié)扎；I/R組、Nic組行心臟結(jié)扎LAD30分鐘，而后再松解120分鐘再灌注操作。制作I/R模型成

5、功的標準：缺血時左心室前壁的顏色變深（呈紫紅色或是藍紫色），II導聯(lián)同步心電圖顯示ST段抬高≥0.2mV或T波直立，QRS波群增寬或幅度增高；松解結(jié)扎線后冠脈血流恢復，缺血區(qū)心肌顏色恢復，高聳T波快速回落、抬高的ST段回降50％以上。術(shù)后各組取血，檢測血清中肌酸激酶同工酶（creatine kinase isoenzyme, CK-MB），酶聯(lián)免疫吸附（ enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)

6、）法測腫瘤壞死因子-α（Tumor necrosis factor-α, TNF-α）、白介素-6（Interleukin-6, IL-6），黃嘌呤氧化酶法測心肌總超氧化物岐化酶（ total superoxide dismutase, T-SOD）活性，硫代巴比妥酸（thiobarbimric acid, TBA）法測心肌丙二醛（ malondialdehyde, MDA）水平；雙染色法（2,3,5-氯化三苯基四氮唑（2,3,5-tr

7、iphenyl tetrazolium chloride, TTC）與伊文氏藍（Evans blue））測心肌梗死面積，肉眼可觀察梗死區(qū)域心肌是灰白色，缺血區(qū)域心肌是淺紅色，正常區(qū)域心肌是藍色。梗死面積表示為AN/AR，即總梗死區(qū)面積（area of necrosis, AN）/總危險區(qū)面積（area at risk, AR，為梗死區(qū)同缺血區(qū)面積總和）（AN/AR），危險區(qū)面積表示為 AR/ALV，即危險區(qū)面積/左室面積（ area o

8、f left ventricle, ALV），應用計算機的分析軟件系統(tǒng)分析各組AN/AR和AR/ALV。
　　應用SPSS13.0軟件對各組數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，計量資料統(tǒng)計指標通過檢驗符合正態(tài)性及方差齊性，則以均數(shù)±標準差（x_±s）表示，兩組之間的比較采用成組t檢驗，多組間比較采用完全隨機設(shè)計資料的單因素方差分析（one-way ANOVA）、秩和檢驗（Kruskal-WAllis H），兩兩之間比較則采用LSD法分析，檢驗水準設(shè)

9、置為α＝0.05。
　　結(jié)果：
　　1心電圖II導聯(lián)變化：本實驗各組術(shù)前大鼠的心電圖為正常心電圖。Sham組心電圖未見明顯變化；I/R組、Nic組成功行大鼠LAD結(jié)扎，顯示QRS波群寬大畸形，ST段弓背狀抬高≥0.2mV，T波上抬；復灌時，T波迅速回落、ST段下降大于50%，I/R組1只大鼠發(fā)生室顫死亡，Nic組1只發(fā)生了短暫室速，I/R組有5只、Nic組有3只出現(xiàn)了房室傳導阻滯，部分遺留病理性Q波。
　　2 CK-M

10、B的比較：Sham組、I/R組、Nic組的 CK-MB分別為：（19.69±4.55）IU/L、（83.52±6.63）IU/L、（75.76±5.25）IU/L，同 Sham組相比，I/R組、Nic組的血清中CK-MB升高（P<0.01），差異有統(tǒng)計學意義；Nic組CK-MB升高但程度較I/R組低（P<0.05），差異有統(tǒng)計學意義。
　　3 TNF-α的比較：Sham組、I/R組、Nic組的 TNF-α分別為：（28.92±15

11、.72）pg/ml、（180.56±22.97）pg/ml、（122.18±19.49）pg/ml，同Sham組相比，I/R組、Nic組血清TNF-α升高（P<0.01），差異有統(tǒng)計學意義；I/R組TNF-α升高較Nic組更明顯（P<0.01），二者相比差異有統(tǒng)計學意義。
　　4 IL-6的比較：三組的IL-6分別為：（63.20±7.90）pg/ml、（164.44±9.29） pg/ml、（120.64±8.11）pg/ml，

12、同Sham組相比，I/R組、Nic組IL-6含量顯著升高（P<0.01），差異有統(tǒng)計學意義；I/R組IL-6升高較Nic組更明顯（P<0.01），二者相比差異有統(tǒng)計學意義。
　　5 T-SOD的比較：三組的T-SOD分別為：（134.50±8.04）U/mgprot、（94.45±6.71）U/mgprot、（112.27±5.17）U/mgprot，同Sham組相比，I/R組、Nic組 T-SOD含量有所下降（P<0.01），差

13、異有統(tǒng)計學意義；I/R組T-SOD下降程度較Nic組更為明顯（P<0.01），二者相比差異有統(tǒng)計學意義。
　　6 MDA的比較：三組的 MDA分別為：（2.18±0.52）nmol/mgprot、（5.47±0.38）nmol/mgprot、（3.80±0.52）nmol/mgprot，同Sham組相比， I/R組、Nic組MDA含量升高（P<0.01），差異有統(tǒng)計學意義；I/R組MDA升高較Nic組明顯（P<0.05），二者相比

14、差異有統(tǒng)計學意義。
　　7心肌梗死的面積比較：I/R組、Nic組危險區(qū)面積（AR/ALV）分別為：（37.77±4.42）%、（37.09±3.36）%，二者差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），兩組心肌缺血的危險程度相近。I/R組、Nic組梗死面積（AN/AR）分別為：（66.52±6.55）%、（48.64±7.86）%，同 I/R組相比，Nic組梗死面積減少（P<0.01），差異具有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)論：
　　1尼