IV型膠原酶門脈灌注對(duì)四氯化碳誘導(dǎo)兔肝硬化影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:應(yīng)用四氯化碳(CCl4)皮下注射方法,建立兔肝硬化動(dòng)物模型。觀察Ⅳ型膠原酶門脈灌注對(duì)肝硬化程度的影響,并檢測(cè)肝組織α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α—SMA)表達(dá)與血清基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制物-1(TIMP-1)變化,了解對(duì)于肝星狀細(xì)胞激活的影響。
　　 方法:雄性新西蘭大白兔隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組臀部皮下注射50％CCl4橄欖油0.23ml/kg,每周2次,對(duì)照組注射等量橄欖油。分別于4周、8周、12周末檢測(cè)各組兔肝臟功能,

2、12周末進(jìn)行肝組織活檢檢查組織病理學(xué)變化。12周后各組動(dòng)物均建立門靜脈給藥通路,將已形成肝硬化并門靜脈插管成功的33只兔隨機(jī)分為兩組(組1,組2),組1為16只、組2為17只。組1經(jīng)門靜脈給藥通路注入0.1％Ⅳ型膠原酶1.5ml,組2注入等量0.9％氯化鈉,5次/周,共4周。將造模對(duì)照組中門靜脈插管成功的30只兔同樣隨機(jī)分為兩組(組3。組4),每組15只,處理方法同前。4周后,將各組動(dòng)物分別采血檢測(cè)血清TIMP-1后處死,留取肝臟組織,

3、觀察其病理學(xué)變化,標(biāo)本固定后,行α—SMA免疫組織化學(xué)染色,行積分光密度、面密度分析。
　　 結(jié)果:隨時(shí)間延長,實(shí)驗(yàn)組免肝臟纖維化程度逐漸加重,血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(GGT)明顯升高。12周末出現(xiàn)白蛋白/球蛋白比例倒置,可觀察到典型肝硬化病理表現(xiàn),兔肝組織出現(xiàn)典型的假小葉結(jié)構(gòu),動(dòng)物死亡率20％,造模成功率83％。對(duì)照組肝臟功能正常,肝臟組織學(xué)結(jié)構(gòu)正常。肝硬化動(dòng)物肝臟α—SMA表達(dá)顯著增

4、強(qiáng):門脈灌注0.1％Ⅳ型膠原酶肝硬化動(dòng)物肝臟纖維化程度明顯降低,但與對(duì)照組相比,實(shí)驗(yàn)組α—SMA積分光密度為8.460±4.238,對(duì)照組為4.090±2.506,二者相比有顯著性差異,證明實(shí)驗(yàn)組肝臟α—SMA表達(dá)顯著增強(qiáng),血清TIMP-1為6.752±0.763ng/ml,較對(duì)照組6.165±0.072 ng/ml顯著升高(P<0.05)。
　　 結(jié)論: CCl4皮下注射可成功地建立兔肝硬化動(dòng)物模型,該方法成功率高,可用于相關(guān)