人骨形成蛋白-4和人骨形成蛋白-7在畢赤酵母中的共表達(dá)及其純化.pdf

1、骨形成蛋白(bone morphogenetic proteins,BMPs),通常也稱之為骨形態(tài)發(fā)生蛋白或骨生成素,是一類廣譜性的生長調(diào)節(jié)因子.已有的研究表明,BMPs的功能不僅僅局限于能誘導(dǎo)未分化的間充質(zhì)細(xì)胞不可逆地轉(zhuǎn)化為軟骨和骨,BMPs還對組織器官的胚胎發(fā)生和形態(tài)形成起重要作用.另外,BMPs還參與調(diào)節(jié)包括間充質(zhì)細(xì)胞、上皮細(xì)胞、造血細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞在內(nèi)的多種細(xì)胞的增殖、分化、趨化性和調(diào)亡.有研究表明,不同種BMP實(shí)現(xiàn)共表達(dá)后,活性

2、比單種表達(dá)時有顯著的提高,如人骨形成蛋白-4(hBMP4)與人骨形成蛋白-7(hBMP7)在CHO細(xì)胞實(shí)現(xiàn)共表達(dá)后,活性比人骨形成蛋白-4單種表達(dá)時提高5倍另有研究表明,BMP異源二聚體的生理效應(yīng)要比同源二聚體高10~20倍之多.因此,該研究嘗試?yán)胔BMP4和hBMP7的成熟肽cDNA片段制備轉(zhuǎn)基因酵母菌株,從而對hBMP4與hBMP7在畢赤酵母細(xì)胞共表達(dá)的實(shí)現(xiàn)和hBMP4/7異源二聚體的形成進(jìn)行探討.該論文的主要工作包括hBMP4與

3、hBMP7在畢赤酵母細(xì)胞中共表達(dá)技術(shù)的建立;hBMP4與hBMP7的發(fā)酵工藝;蛋白純化工藝;抗原反應(yīng)活性及理化性質(zhì)的研究.搖瓶培養(yǎng)確定最適培養(yǎng)基為BMGY/BMMY;培養(yǎng)基的最適pH值為6.0;最佳甲醇誘導(dǎo)濃度為1％;最適誘導(dǎo)周期為96小時.經(jīng)斑點(diǎn)印跡和蛋白質(zhì)印跡證實(shí)了表達(dá)產(chǎn)物含有hBMP4與hBMP7,均具有良好的抗原性和特異性.經(jīng)還原性和非還原性SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳結(jié)合蛋白質(zhì)印跡鑒定,所獲得的hBMP4與hBMP7為單體蛋白,