Stathmin1基因表達(dá)對(duì)微管藥物抑制細(xì)胞增殖作用的影響.pdf

1、學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所提交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作和取得的研究成果。本論文中除引文外，所有實(shí)驗(yàn)、數(shù)據(jù)和有關(guān)材料均是真實(shí)的。本論文中除引文和致謝的內(nèi)容外，不包含其他人或其它機(jī)構(gòu)已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果。其他同志對(duì)本研究所做的貢獻(xiàn)均已在論文中作了聲明并表示了謝意。學(xué)位論文作者簽名：芻敝 日 期：y ∥三．刁f學(xué)位論文使用授權(quán)聲明研究生在校攻讀學(xué)位期間論文工作的知識(shí)產(chǎn)權(quán)單位屬南京師范大學(xué)。學(xué)校有權(quán)保存本學(xué)位論文

2、的電子和紙質(zhì)文檔，可以借閱或上網(wǎng)公布本學(xué)位論文的部分或全部?jī)?nèi)容，可以采用影印、復(fù)印等手段保存、匯編本學(xué)位論文。學(xué)?？梢韵驀?guó)家有關(guān)機(jī)關(guān)或機(jī)構(gòu)送交論文的電子和紙質(zhì)文檔，允許論文被查閱和借閱。( 保密論文在解密后遵守此規(guī)定)保密論文注釋?zhuān)罕緦W(xué)位論文屬于保密論文，密級(jí)：——保密期限為——年。學(xué)位論文作者簽名：自欽日 期：矽拈1 指剝讎：柳日 期：州．k ．幻摘要達(dá)水平經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄P C R 檢測(cè)后顯示，在藥物D P P T 濃度為0 ．1 州時(shí)，m

3、 R N A 相對(duì)表達(dá)水平降低了6 0 ．6 ％，在藥物紫杉醇濃度為O ．5 州時(shí)，m R N A 相對(duì)表達(dá)水平降低了7 9 ．9 ％，之后隨著藥物濃度的增加，S T M N l 的m R N A 相對(duì)表達(dá)水平出現(xiàn)一定上升趨勢(shì)。綜上所述，紫杉醇和D P P T 的抗癌作用與細(xì)胞S T M N l 表達(dá)水平有著密切的聯(lián)系。本實(shí)驗(yàn)以人肺腺癌細(xì)胞A 5 4 9 為實(shí)驗(yàn)材料，利用R N A 干擾技術(shù)，成功地構(gòu)建了人S t a t h m i n

4、 l s h R N A 干擾表達(dá)載體，重組干擾質(zhì)粒分別命名為S T M N l ／h s h R N A l 、S T M N l ／h s h R N A 2 和S T M N l ／h s h I 喇A 3 ，采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染人肺腺癌細(xì)胞A 5 4 9 ，通過(guò)檢測(cè)人S t a t h m i n ls h R N A 干擾質(zhì)粒對(duì)細(xì)胞中S t a t h m i n l表達(dá)水平的下調(diào)作用來(lái)計(jì)算出干擾效率，通過(guò)轉(zhuǎn)染干擾質(zhì)粒后的人肺腺癌細(xì)

5、胞A 5 4 9 細(xì)胞的遷移水平的變化來(lái)探討人S t a t h m i n l 基因表達(dá)水平與細(xì)胞遷移的相關(guān)性。W e s t e r nB l o t 檢測(cè)結(jié)果顯示，S T M N l ／h s h R N A l 和S T M N l ／l l s h R N A 3 干擾質(zhì)粒使A 5 4 9 細(xì)胞中S t a t h m i n I 蛋白表達(dá)水平分別降低了8 2 ．2 ％和7 8 ．4 ％，R T - P C R檢測(cè)結(jié)果顯示，S

6、 T M N lm R N A 的表達(dá)水平分別降低了5 9 ．1 ％和5 4 ．7 ％。由此可知，S T M N l ／1 1 s h I ⅢA 1 和S T M N l ／I l s h R N A 3 干擾質(zhì)粒的構(gòu)建，能有效干擾S t a t h m i n l 的表達(dá)。細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，相比于轉(zhuǎn)染陰性對(duì)照質(zhì)粒的A 5 4 9細(xì)胞的遷移率，轉(zhuǎn)染干擾質(zhì)粒S T M N l m s h R N A l 的細(xì)胞遷移率在8 h 和1 6

7、 h 時(shí)分別顯著降低了6 3 ．2 ％年1 35 5 ．8 ％，轉(zhuǎn)染干擾質(zhì)粒S T M N l ／h s h R N A 3 分別顯著降低了7 2 ．2 ％和6 2 ．4 ％。由此說(shuō)明，S T M N l 的表達(dá)水平的降低，可以明顯降低人肺腺癌細(xì)胞A 5 4 9 的遷移率。本實(shí)驗(yàn)還進(jìn)一步探討了S t a t h m i n I 干擾和藥物聯(lián)合作用對(duì)人肺腺癌細(xì)胞A 5 4 9 細(xì)胞存活率的影響。結(jié)果數(shù)據(jù)表示，0 ．5 0 M 紫杉醇和去氧

8、鬼臼毒素作用A 5 4 9細(xì)胞時(shí)細(xì)胞存活率分別為2 8 ．5 ％和4 5 ．8 ％，然而S T M N l ／l l s h R N A l 干擾與0 ．5 9 M紫杉醇、D P P T 聯(lián)合作用A 5 4 9 細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞存活率降低至2 1 ．2 ％和3 2 ．4 ％；S T M N l ／h s h R N A 3 干擾與0 ．5 9 M 紫杉醇、D P P T 聯(lián)合作用A 5 4 9 細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞存活率降低至2 7 ．2 ％和3