中空纖維細胞捕獲和中空纖維液相微萃取-高效液相色譜法研究半枝蓮中黃酮類和酚酸類的抗癌活性.pdf

1、目的：
　　建立中空纖維細胞捕獲-高效液相色譜法(Hollow fibre cell fishing with high performance liquid chromatography，HFCF-HPLC）及中空纖維液相微萃取-高效液相色譜法（Hollow fibre liquid phase microextraction with HPLC，HFLPME-HPLC）；將HFCF-HPLC和HFLPME-HPLC結合研究半枝

2、蓮中黃酮類和酚酸類在體外的抗腎癌活性和燈盞花素注射液中野黃芩苷（含量>85％，半枝蓮的主要活性成分）及其代謝物野黃芩素在體內的抗肝癌、腎癌活性。
　　方法：
　　將種植有人腎癌ACHN細胞或充滿ACHN細胞膜和細胞器混懸液的中空纖維插入到半枝蓮醇提或者水提液中，篩選和鑒定半枝蓮中的抗腎癌黃酮類活性成分野黃芩苷、黃芩苷、木犀草素、芹菜素、漢黃芩素等和酚酸類活性成分原兒茶酸等，并結合HPLC，確定它們的結構，研究它們與ACHN細

3、胞的結合能力及結合部位，探討它們與靶點的作用特點。將內腔充滿辛醇的中空纖維插入到半枝蓮水提液中，萃取、富集和濃縮半枝蓮中篩選出的黃酮類和酚酸類活性成分，并結合HPLC，測定這些活性成分的含量。將燈盞花素注射液給大鼠腹腔注射一定時間后，取血漿、尿液、肝和腎臟樣品，將種植人腎癌ACHN細胞、人肝癌HepG-2細胞和內腔充滿辛醇的中空纖維分別置血漿、尿液和肝腎臟勻漿樣品中，研究燈盞花素中野黃芩苷及其代謝物野黃芩素的血藥濃度、到達靶點后與相應靶

4、細胞ACHN或HepG-2的結合能力、組織濃度分布和藥代動力學，進一步研究野黃芩苷及其代謝物野黃芩素的抗肝癌、腎癌活性。
　　結果：在本實驗的條件下，通過HFCF-HPLC對半枝蓮中黃酮類和酚酸類抗癌活性成分研究可知：（1）半枝蓮可以明顯誘導ACHN細胞凋亡，尤其是早凋。（2）經過與對照品的保留時間比對，半枝蓮中篩選出并能確定結構的活性成分有：野黃芩苷、黃芩苷、木犀草素、芹菜素、漢黃芩素和原兒茶酸；未能確定結構，但與癌細胞結合能力

5、強的活性成分有X1、X2、X3和X4。（3）原兒茶酸、野黃芩苷、木犀草素、漢黃芩素的含量分別為3.3、4.1、0.27、0.22 mg/g，但是黃芩苷和芹菜素的含量低于檢測限。（4）腹腔注射燈盞花素注射液12 min后，在大鼠血漿中可篩選到野黃芩苷及其代謝物野黃芩素；野黃芩苷與ACHN和HepG-2細胞的結合能力較強，野黃芩素與它們的結合能力較弱；在相應的組織樣品中野黃芩苷比野黃芩素與ACHN細胞的結合能力強，二者對HepG-2細胞的影

6、響較弱。（5）野黃芩苷和野黃芩素的藥時曲線均出現雙峰，分別在0.25和0.5 h達峰，峰濃度Cmaxs分別為2.23和2.57μg/mL，消除半衰期t1/2βs分別為20.87±1.26 h和11.60±1.28 h，總生物利用度AUC0-∞分別為31.22和26.25 mg/(L·h)。
　　結論：
　　本文結合HFCF-HPLC和HFLPME-HPLC研究半枝蓮中微量黃酮類和酚酸類以及燈盞花素中野黃芩苷及其代謝物野黃芩素

7、的抗癌活性，可以得出（1）半枝蓮中微量黃酮類和酚酸類成分具有潛在的抗腎癌活性，超微量成分的抗癌活性更強。因此，黃酮類和酚酸類的抗腎癌活性與其在半枝蓮中的含量無關。（2）大鼠腹腔注射燈盞花素注射液后，其主要成分野黃芩苷能迅速被吸收并部分代謝為野黃芩素，二者迅速到達靶器官肝和腎，對相應HepG-2細胞和ACHN細胞進行干預，并維持一定的濃度。但值得一提的是，本研究只探討了半枝蓮或燈盞花素注射液中主要成分的抗癌活性，并不是所有成分或代謝物的活