原位可注射殼聚糖基溫敏水凝膠支架負(fù)載殼聚糖納米粒對pDNA-BMP2體外緩釋性能及穩(wěn)定性的評價(jià).pdf

1、目的:本實(shí)驗(yàn)采用離子交聯(lián)法制備含骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2質(zhì)粒DNA(pDNA-BMP2)的殼聚糖納米粒，即CSn(pDNA-BMP2)，將其與原位可注射殼聚糖基溫敏水凝膠支架(CS/α,β-GP)混合，制備CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP復(fù)合溫敏體系，評價(jià)該體系對pDNA-BMP2的體外緩釋性能及穩(wěn)定性。
　　方法：
　　1.離子交聯(lián)法制備CSn(pDNA-BMP2)，透射電鏡(TEM)觀察其微觀形態(tài)；0.8％瓊脂糖凝膠電

2、泳分析CSn與pDNA-BMP2結(jié)合能力；高速離心法檢測CSn對pDNA-BMP2的包封率及載藥率。
　　2.采用物理交聯(lián)制備CS/α,β-GP溫敏水凝膠，磁力攪拌下將CSn(pDNA-BMP2)分散于CS/α,β-GP，構(gòu)建出復(fù)合體系CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP。試管倒置法檢測復(fù)合體系的溫敏特性；掃描電鏡(SEM)觀察復(fù)合體系的微觀形態(tài);稱重法檢測CS/α,β-GP水凝膠的體外溶脹和降解性能。
　　3.以PBS

3、和人工唾液作為釋放介質(zhì)，考察37℃條件下CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP復(fù)合體系對pDNA-BMP2的釋藥動力學(xué)。
　　4.選擇釋釋放介質(zhì)為人工唾液并釋放時(shí)間長的的樣品 A、B、C、D，濃度均調(diào)至0.4μg/mL，通過質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌實(shí)驗(yàn)及基因測序來檢測該復(fù)合體系對重組質(zhì)粒pDNA-BMP2的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性的影響。
　　結(jié)果：
　　1.TEM顯示CSn分散良好，為規(guī)則球形，粒徑約為200nm； CSn(pDNA-B

4、MP2)粒徑略有增大,約為500nm。瓊脂糖凝膠電泳顯示CSn可以有效地結(jié)合pDNA-BMP2，且兩實(shí)驗(yàn)組的包封率和載藥率分別均高于80%和30%。
　　2.CS/α,β-GP在37℃條件下溶膠-凝膠變相時(shí)間為5min，CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP復(fù)合體系的凝膠時(shí)間減少至3min; SEM顯示CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP復(fù)合水凝膠呈網(wǎng)狀交聯(lián)結(jié)構(gòu)，CSn(pDNA-BMP2)可鑲嵌在該支架上;CS/α,β-G

5、P在pH4.0介質(zhì)中的溶脹率和降解率高于pH6.8的介質(zhì)。
　　3.體外釋放結(jié)果顯示，在相同釋放介質(zhì)及pH值條件下，復(fù)合體系對pDNA-BMP2的緩釋效果優(yōu)于CSn；在不同釋放介質(zhì)及pH的條件下，DNA的累計(jì)釋放率在pH4.0的條件下高于pH6.8的條件。
　　4.質(zhì)粒轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，4個(gè)樣品的轉(zhuǎn)化效率均高于對照組；基因測序分析顯示未發(fā)生DNA序列發(fā)生插入、缺失、重排、修飾等現(xiàn)象。
　　結(jié)論:
　　1.CSn具