中藥復(fù)方錫類散促粘膜潰瘍愈合作用機(jī)制及有效部位群研究.pdf

1、錫類散原載清·尤在涇《金匱翼》,由青黛、珍珠粉、象牙屑、壁錢炭、牛黃、人指甲和冰片組成,具清火解毒、活血止痛、托毒排膿、祛腐生肌之功效,主治咽喉紅腫、糜爛、唇舌腫痛等癥?，F(xiàn)代臨床常用于潰瘍性結(jié)腸炎、口腔潰瘍和其它潰瘍等。到目前為止,有關(guān)錫類散現(xiàn)代藥理及有效部位群研究很少。本研究主要擬從細(xì)胞水平研究錫類散促潰瘍愈合的作用機(jī)制及其主要的有效部位群。主要研究?jī)?nèi)容及結(jié)果如下:
　　 1.錫類散體外抑菌、鎮(zhèn)痛和抗炎試驗(yàn)。
　　 ①

2、采用紙片法和試管二倍稀釋法測(cè)定了錫類散體外抑菌效果,結(jié)果表明:錫類散體外對(duì)金黃色葡萄球菌、白色念珠菌和銅綠假胞菌的最小殺菌濃度(MBC)為12.5m g/mL,對(duì)大腸埃希菌的最小殺菌濃度(MBC)為25mg/mL。
　　 ②采用小鼠熱板法和醋酸扭體法測(cè)定了錫類散鎮(zhèn)痛效果,結(jié)果表明:錫類散具有抗炎性鎮(zhèn)痛作用。
　　 ③采用二甲苯誘導(dǎo)的小鼠耳腫脹、角叉菜膠誘導(dǎo)的小鼠足腫脹和棉球誘導(dǎo)的慢性肉芽腫試驗(yàn)測(cè)定了錫類散抗炎效果,結(jié)果表

3、明:錫類散對(duì)急性、亞急性和慢性炎癥都有很好的抑制作用。
　　 2.采用組織塊法建立了小鼠口腔成纖維細(xì)胞原代培養(yǎng)體系。結(jié)果表明:
　　 ①接種5天后,組織塊邊緣開始長(zhǎng)出細(xì)胞,細(xì)胞呈多邊形；培養(yǎng)20天后,80％瓶底長(zhǎng)滿細(xì)胞,呈長(zhǎng)紡錘狀,可傳代。
　　 ②采用MTT法檢測(cè)不同代數(shù)的細(xì)胞活力,證明在第六代以內(nèi),細(xì)胞仍可保持較高的增殖活力,確定本試驗(yàn)所用細(xì)胞為第3—4代細(xì)胞。
　　 ③確定最佳接種濃度(96孔板,×

4、200μL):對(duì)于促增殖藥的最佳接種濃度為2×104,對(duì)于抑制細(xì)胞生長(zhǎng)的最佳接種濃度為4×104。
　　 3.考察了錫類散對(duì)成纖維細(xì)胞增殖、膠原合成、基質(zhì)金屬蛋白酶-2,9(MMP-2,9)和組織金屬蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)的影響。結(jié)果表明:
　　 ①錫類散水提物可顯著(P<0.05)促進(jìn)成纖維細(xì)胞增殖和膠原合成,但其醇提物未達(dá)到顯著性水平。確定錫類散水提物和醇提物的最低有效濃度為125μ g/mL。
　

5、　 ②錫類散水提物(125μ g/mL)和錫類散醇提物(125μ g/mL)可顯著(P<0.05)提高M(jìn)MP-2活性,但對(duì)MMP-9活性基本上無影響。
　　 ③錫類散水提物(125μ g/mL)和錫類散醇提物(125μ g/mL)都極顯著(P<0.01)增加TIMP-1合成。
　　 4.測(cè)定了錫類散提取物體外還原力及對(duì)H2O2誘導(dǎo)損傷的成纖維細(xì)胞的SOD、MDA和NO的影響。結(jié)果表明:
　　 ①錫類散水提物和醇

6、提物本身都有較好的還原力,1000μ g/mL錫類散水提物的還原力略高于40μ g/mL的維生素C。
　　 ②確定了在H2O2誘導(dǎo)的成纖維細(xì)胞損傷模型中,H2O2誘導(dǎo)濃度為100μ g/mL,誘導(dǎo)時(shí)間16小時(shí)。
　　 ③錫類散水提物(125μ g/mL)和醇提物(125μ g/mL)都能顯著提高SOD活性；可極顯著(P<0.01)降低過氧化氫損傷的成纖維細(xì)胞的丙二醛釋放量；可使細(xì)胞NO釋放量極顯著(P<0.01)增加。<

7、br>　　 5.考察了錫類散各單味藥不同分離部位對(duì)成纖維細(xì)胞增殖、膠原合成、基質(zhì)金屬蛋白酶-2,9和金屬蛋白酶抑制因子-1的影響。初步確定了錫類散七個(gè)單味藥促成纖維細(xì)胞增殖及膠原合成的主要有效部位。試驗(yàn)結(jié)果表明:
　　 ①在錫類散七個(gè)單味藥不同分離部位中,促成纖維細(xì)胞增殖和膠原合成的主要部位有:青黛水提物；珍珠粉大于14KD的組分；象牙屑小于14KD的組分以及人指甲水提物和醇提物。
　　 ②在錫類散七個(gè)單味藥不同分離部

8、位中,抑制成纖維細(xì)胞增殖和膠原合成的主要部位有:青黛醇提物；牛黃:冰片和壁錢炭醇提物。
　　 6.測(cè)定了錫類散七個(gè)單味藥不同分離部位體外還原力及對(duì)H2O2誘導(dǎo)損傷的成纖維細(xì)胞SOD、MDA和NO的影響。試驗(yàn)結(jié)果表明:青黛水提物,人指甲水提物和醇提物有很好的抗氧化作用。
　　 本研究結(jié)果顯示,錫類散促潰瘍愈合的作用機(jī)制與其促成纖維細(xì)胞增殖、膠原合成、MMP-2、TIMP-1以及抗氧化密切有關(guān)。在其各單味藥不同提取部位中,能

9、促進(jìn)成纖維細(xì)胞增殖、膠原合成、MMP-2和TIMP-1的主要部位有青黛水提物、象牙屑水提物小分子部位、珍珠粉水提物大分子部位以及人指甲水提物和醇提物。青黛醇提物、牛黃和冰片對(duì)纖維細(xì)胞增殖、膠原合成有抑制作用,但根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)推測(cè)這幾味藥或部位應(yīng)與抗炎密切相關(guān),同樣是潰瘍愈合不可缺少的。壁錢炭在本研究中的結(jié)果是抑制成纖維細(xì)胞增殖和膠原合成,不利于潰瘍愈合,對(duì)于壁錢炭是否具有其它的與潰瘍愈合相關(guān)的作用,由于無文獻(xiàn)可查,目前不能確定,有待進(jìn)一步