益氣活血方藥配伍治療冠心病療效及作用機制的系統(tǒng)性研究.pdf

1、冠心病是臨床上常見的心血管系統(tǒng)疾病之一，應當屬于祖國傳統(tǒng)醫(yī)學中“胸痹”、“心痛”等范疇，中醫(yī)認為其為本虛標實之證，本虛多為氣虛，標實則多為血瘀。目前開展的中醫(yī)藥治療冠心病療效及作用機制研究，多為單一臨床療效評價，或藥理作用機制研究，而較少從系統(tǒng)性研究角度，較為全面地，循序漸近地揭示中醫(yī)藥治療冠心病的核心藥物、有效法則、臨床療效、藥理機制等。故本研究結合導師多年診療冠心病的臨床實踐經(jīng)驗，采用中醫(yī)藥文獻數(shù)據(jù)挖掘方法，探索中醫(yī)藥治療冠心病的用

2、藥規(guī)律，通過搜集整理《中華醫(yī)典》收錄的治療冠心病名藥，篩選出冠心病的主要治則治法為益氣活血法，進而采用循證醫(yī)學的系統(tǒng)評價方法，全面獲取益氣活血方藥配伍治療冠心病的臨床隨機對照試驗研究，評估現(xiàn)代醫(yī)家應用益氣活血方藥配伍治療冠心病的臨床療效及其安全性，最終確定益氣活血方藥配伍治療冠心病的代表藥物黃芪、丹參，并分別提取兩者有效成分黃芪甲苷、丹參酮 IIA，采用細胞生物學，分子生物學等實驗研究方法，觀察其對分化后的骨髓間充質(zhì)干細胞（Mesenc

3、hymal stromal cells，MSCs）間隙連接蛋白（Connexin protein，Cx）表達、縫隙連接通道（Gap junction channel，GJC）功能調(diào)節(jié)以及促新生血管生成能力的影響，以期為中醫(yī)藥治療冠心病藥物研發(fā)提供研究思路指導及有效干預措施。
　　第一部分《中華醫(yī)典·名藥》收錄治療冠心病用藥規(guī)律研究
　　1.目的：
　　明確《中華醫(yī)典·名藥》胸痹心痛證治用藥特點及主要治則治法。
　

4、　2.研究方法：
　　計算機檢索《中華醫(yī)典》光盤版（第5版）名藥部分，以“胸痹”、“心痛”、“心悸”、“怔忡”、“冠心病”、“心絞痛”、“心肌缺血”、“冠狀動脈硬化”等為檢索詞，檢索方式為內(nèi)容檢索，通過制定嚴格納入及排除標準，篩選及整理治療胸痹心痛方藥數(shù)據(jù)，建立Excel數(shù)據(jù)庫，采用SPSS19.0軟件統(tǒng)計分析。
　　3.結果：
　　從《中華醫(yī)典·名藥》檢索到264首方藥約8萬字的文獻資料，依據(jù)納入和排除標準，篩選出1

5、00首符合納排標準的治療冠心病方藥，研究結果顯示：①胸痹心痛治療法則：以益氣補虛、活血祛瘀為主；②治療胸痹心痛單味中藥使用頻次：由高至低分別為丹參、黃芪、人參、川芎、冰片等；③治療胸痹心痛中藥功效：按功效分為16大類，補虛類中藥高達（33％），其中以補氣藥所占比重最大（43%），其次為為活血化瘀類中藥（14%）；④治療胸痹心痛單味中藥性味歸經(jīng)：藥味以甘（34%）、辛（30%）味為主。藥性多以溫熱為主。歸經(jīng)主入心（23%）、脾（18%）、

6、肝（18%）經(jīng)。
　　4.結論：
　　《中華醫(yī)典·名藥》收錄治療胸痹心痛前三位高頻藥物為丹參、黃芪、人參。其核心治療法則為益氣、活血，兼以理氣，安神。
　　第二部分益氣活血方藥配伍治療冠心病的系統(tǒng)評價（Meta分析）
　　1.目的：
　　評價益氣活血方藥配伍治療冠心病的臨床有效性及安全性。
　　2.研究方法：
　　2.1計算機檢索中國生物醫(yī)學文獻數(shù)據(jù)庫(China Biology Medicin

7、e disc，CBM)、中國期刊全文數(shù)據(jù)庫(CNKI)、維普期刊全文數(shù)據(jù)庫（VIP）、Pubmed等中英文數(shù)據(jù)庫（檢索時間范圍為2010-2014年）。采用循證檢索策略及方法，全面獲取益氣活血方藥配伍治療冠心病的隨機及半隨機對照臨床試驗，通過制定嚴格的納入及排除標準，準確篩選得到目標研究文獻。
　　2.2制定文獻資料提取表，由雙人獨立提取研究基本情況、病患基本信息、合并病信息、干預措施、臨床療效指標等，不一致者由第三方專家組成員裁

8、定。并采用改良Jadad量表評價研究文獻質(zhì)量。
　　2.3采用RevMan5.3軟件合并分析療效指標效應量，系統(tǒng)評價益氣活血方藥配伍治療冠心病的臨床有效性。
　　2.4采用描述性研究方法評價益氣活血方藥配伍治療冠心病的臨床安全性。
　　3.結果：
　　3.1兩名研究者逐一閱讀所檢索到的624篇文獻資料，嚴格參照納排標準共28篇合計病例2900例入選，其中治療組1513例，對照組1387例。采用RevMan5.3軟

9、件分析得：在臨床總療效、中醫(yī)證候療效、心絞痛療效、心電圖療效等指標改善率方面，西醫(yī)常規(guī)治療基礎加益氣活血方藥配伍治療冠心病，優(yōu)于單純西醫(yī)常規(guī)治療，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　3.2分析以西醫(yī)常規(guī)治療消心痛為對照組的631例冠心病病例結果顯示：西醫(yī)常規(guī)治療消心痛基礎上加用益氣活血方藥配伍，與單純消心痛為主的西醫(yī)常規(guī)治療相比較，其臨床總療效、心電圖療效合并OR[95％CI]值分別為3.74[2.08，6.74]、2.23

10、[1.92，3.85]，具有統(tǒng)計學差異（P＜0.05），說明在西醫(yī)常規(guī)治療消心痛基礎上加益氣活血方藥配伍的治療組對冠心病臨床總療效、心電圖療效改善率，優(yōu)于單純以消心痛為主的西醫(yī)常規(guī)治療對照組。
　　3.3分析以消心痛和阿司匹林聯(lián)合運用的西醫(yī)常規(guī)治療為對照組的1877例冠心病患者，結果顯示：在以消心痛及阿司匹林合用的西醫(yī)常規(guī)治療基礎上加益氣活血方藥配伍，與單純消心痛及阿司匹林合用的西醫(yī)常規(guī)治療比較，其臨床總療效、中醫(yī)證候療效、心絞痛

11、療效和心電圖療效合并OR[95％CI]值分別為4.48[3.25，6.19]、5.21[2.13，12.75]、2.77[1.57，4.88]、2.57[1.92，3.45]，具有統(tǒng)計學差異（P＜0.05），說明治療組對冠心病臨床總療效、中醫(yī)證候療效、心絞痛療效和心電圖療效改善，優(yōu)于以消心痛和阿司匹林為主的西醫(yī)常規(guī)治療對照組。
　　3.4對納入研究的2900例冠心病病例進行不良反應/事件觀察，益氣活血方藥配伍治療組共出現(xiàn)5例不良反

12、應/事件，均為惡心、嘔吐等胃腸道反應，而單純西醫(yī)常規(guī)治療組出現(xiàn)14例不良反應/事件，多表現(xiàn)為頭暈、惡心、無力等癥狀。
　　4.結論：
　　4.1在西醫(yī)常規(guī)治療基礎上加用益氣活血方藥配伍治療冠心病，在臨床總療效、中醫(yī)證候療效、心絞痛療效和心電圖療效等方面，優(yōu)于單純以消心痛或消心痛及阿司匹林為主的西醫(yī)常規(guī)治療。
　　4.2益氣活血方藥配伍治療冠心病，不良反應較少。
　　第三部分丹參酮IIA、黃芪甲苷及其配伍對MSCs

13、細胞連接蛋白表達及促血管生成作用的研究
　　1.目的：
　　從黃芪甲苷、丹參酮IIA及其配伍對 MSCs連接通訊功能的調(diào)節(jié)角度，探討此配伍是否通過間隙連接蛋白表達，調(diào)節(jié)連接通訊功能而促進血管生成，為益氣活血方藥配伍治療冠心病提供實驗依據(jù)。
　　2.研究方法：
　　2.1采用全骨髓貼壁法分離培養(yǎng)乳鼠MSCs，獲得原代MSCs，倒置顯微鏡下觀察其形態(tài)，流式細胞儀鑒定 MSCs表面分子，并將該細胞向內(nèi)皮細胞誘導分化，然

14、后采用免疫組化法觀察誘導后細胞 FⅧ因子表達。
　　2.2誘導后的內(nèi)皮樣細胞隨機分為如下4組并干預72小時：①空白組；②丹參酮IIA組；③黃芪甲苷組；④合用組。
　　2.3分別采用實時定量 PCR、Western blot檢測誘導后 MSCs細胞Cx37、Cx40、Cx43 mRNA及蛋白表達。
　　2.4劃痕實驗檢測內(nèi)皮樣細胞間隙連接通訊功能。
　　2.5 MTT法檢測誘導后內(nèi)皮樣細胞的增殖。
　　2.6

15、流式細胞儀檢測誘導后內(nèi)皮樣細胞的細胞周期。
　　2.7三維基質(zhì)膠立體培養(yǎng)法檢測內(nèi)皮樣細胞的毛細血管管狀結構形成能力。
　　3.結果：
　　3.1經(jīng)過全骨髓貼壁法獲得的細胞呈短梭形、紡錘形，流式細胞術檢測提示CD44、CD90分子表達呈陽性，CD45、CD34分子表達呈陰性，證實提取的原代細胞為骨髓間充質(zhì)干細胞，經(jīng)VEGF、bFGF誘導該細胞，并采用免疫組化法觀察FⅧ因子表達，結果提示FⅧ因子相關抗原表達呈陽性，證實誘導

16、后細胞為內(nèi)皮樣細胞。
　　3.2實時定量PCR檢測誘導后 MSCs提示：益氣活血合用組、丹參酮IIA組、黃芪甲苷組、空白組均可見 Cx37、Cx40、Cx43mRNA的表達，其中合用組表達最強，丹參酮IIA組、黃芪甲苷組、空白組表達依次減弱，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。Western blot檢測誘導后 MSCs的 Cx37、Cx40、Cx43蛋白的表達合用組高于單用組，具有統(tǒng)計學差異（P<0.05），黃芪甲苷組略低于丹參酮

17、IIA組，無統(tǒng)計學差異。
　　3.3染料劃痕實驗發(fā)現(xiàn)：合用組熒光染料主要出現(xiàn)在劃痕以外的3-4層細胞內(nèi)且較為明顯；丹參酮IIA組熒光染料則主要出現(xiàn)在劃痕2-3層細胞中而且亮度較高；黃芪甲苷組熒光染料出現(xiàn)在劃痕1-2層細胞中亮度較丹參酮IIA組略低；而空白組熒光染料主要出現(xiàn)在劃痕1層細胞中且亮度最低。其中合用組強于丹參酮IIA組和黃芪甲苷組，后兩組間差異無統(tǒng)計學意義。
　　3.4 MTT法檢測細胞增殖結果提示：合用組、丹參酮I

18、IA組、黃芪甲苷組細胞增殖比例均高于空白組，合用組的增殖能力高于丹參酮IIA組與黃芪甲苷組，而丹參酮IIA組的增殖能力大于黃芪甲苷組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　3.5流式細胞儀檢測細胞周期結果顯示合用組、丹參酮IIA組、黃芪甲苷組細胞S期比例明顯高于空白組，合用組高于單用組，單用組中丹參酮IIA組細胞S期比例高于黃芪甲苷組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　3.6三維基質(zhì)膠立體培養(yǎng)法檢測內(nèi)皮樣細胞的毛細血