利多卡因、普魯卡因和布比卡因在生物樣品中的分解動(dòng)力學(xué)研究.pdf

1、目的: 1 建立生物樣品中利多卡因、普魯卡因、布比卡因原體及分解產(chǎn)物的氣相色譜(GC)及氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(GC/MS)定性定量分析方法； 2 建立生物樣品中利多卡因、普魯卡因和布比卡因的分解動(dòng)力學(xué)研究方法； 3 研究不同存貯條件下生物樣品中利多卡因、普魯卡因和布比卡因的濃度變化規(guī)律，指導(dǎo)選擇最佳檢材存放條件，為局麻藥硬膜外麻醉意外死亡和中毒案件的法醫(yī)學(xué)鑒定提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法: 1 氣相色譜/氣

2、質(zhì)聯(lián)用分析方法： 1.1 樣品處理：腦組織(勻漿)、血液、尿液樣品中加入內(nèi)標(biāo)物，經(jīng)酸、堿化處理后，乙醚萃取。 1.2 氣相色譜分析條件：DB-5毛細(xì)管柱(30m x 0.25mm x 0.25μm)，程序升溫模式：150℃(1min)→10℃·min<'-1>→280℃(2min)；檢測(cè)器為NPD，溫度300℃；進(jìn)樣口空氣60KPa，氫氣2.3 KPa；載氣：N<,2> 1.5 ml·min<'-1>。 1.3

3、氣質(zhì)聯(lián)用分析條件：DB-5毛細(xì)管柱(30m x 0.25mm x 0.25μm)，電子能量70ev，質(zhì)量范圍：50～650，柱溫：150℃(1min)→10℃·min<'-1>→280℃(2min)；離子源溫度：200℃，傳輸線溫度：250℃，載氣：He：1.5 ml·min<'-1>。 1.4 定性定量方法：利用保留時(shí)間結(jié)合特征離子峰(氣-質(zhì)聯(lián)用)定性，內(nèi)標(biāo)法和工作曲線法(氣相色譜)定量。 2 分解動(dòng)力學(xué)研究：

4、 2.1 分組：利多卡因、普魯卡因和布比卡因?qū)嶒?yàn)組犬各4只，分別按2倍極量30mg/kg、60mg/kg和10mg/kg于5分鐘內(nèi)勻速注入犬蛛網(wǎng)膜下腔。 2.2 分解動(dòng)力學(xué)研究：注入藥液后立即處死動(dòng)物，分別采取腦組織、心血和尿液，每種樣品分三等份分別置于20℃、4℃、-20℃環(huán)境中保存，于死后不同時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)各保存條件下利多卡因、普魯卡因和布比卡因的含量，winolin軟件擬合分解動(dòng)力學(xué)方程，計(jì)算利多卡因、普魯卡因和布比卡因在不同

5、保存條件下(20℃、4℃、-20℃)不同樣品(腦組織、血液和尿液)中的分解半衰期。 2.3 SAS9.0重復(fù)測(cè)量設(shè)計(jì)資料方差分析法統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，對(duì)各藥的溫度之間、時(shí)間之間進(jìn)行配對(duì)t檢驗(yàn)，比較不同溫度對(duì)各藥的分解動(dòng)力學(xué)過(guò)程有無(wú)影響。 結(jié)果: 1 氣相色譜/氣質(zhì)聯(lián)用分析：利多卡因、普魯卡因、布比卡因、SKF<,525A>和各藥分解產(chǎn)物的保留時(shí)間分別為8.20、9.70、12.00、12.10和7.80、8.62、11.5

6、8min；特征離子片段分別為86、58、30；86、99、120；140、84、98;86、91、99和68、121、165；120、137、92；98、70、42。各峰形均對(duì)稱，可完全分離。腦組織、血液和尿液中利多卡因、普魯卡因和布比卡因工作曲線線性檢測(cè)范圍分別為0.5～20μg·ml<'-1>、0.5～25μg·ml<'-1>和0.5～20μg.ml<'-1>，最低檢出限0.05μg.ml<'-1>，方法回收率91±2.1％～114

7、±4.2％，RSD均小于10％。 2 利多卡因、普魯卡因和布比卡因在生物樣品中的分解動(dòng)力學(xué) 2.1 分解動(dòng)力學(xué)方程及參數(shù)：利多卡因、普魯卡因和布比卡因在生物樣品中的分解動(dòng)力學(xué)符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)過(guò)程，可用1gC=1gCo-kt/2.303表示，式中k為一級(jí)分解速率常數(shù)。腦組織、血液和尿液中利多卡因在20℃、4℃和-20℃存儲(chǔ)條件下的分解半衰期t<,1/2>分別為17、30、34；27、35、35和13、14、47天；普魯卡因

8、的分解半衰期t<,1/2>分別為2、2、2;2、7、15和35、42、49天；布比卡因的分解半衰期t<,1/2>分別為33、64、72；51、71、80和17、60、81天。 2.2 各藥不同儲(chǔ)存條件下的含量變化趨勢(shì)本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示，20℃、4℃、-20℃保存時(shí)，腦組織、血液和尿液中利多卡因含量均在第8、48和8天顯著下降(P<0.05)；腦組織中利多卡因含量在20℃保存80天、4℃保存120天降為0μg/g，-20℃降至初始

9、值的4.2％；血液中利多卡因含量在20℃保存96天降為0μg/ml，4℃和-20℃保存120天分別降至初始值的5.0％和7.6％；尿液中利多卡因含量在20v、4℃和-20℃保存120天分別降至初始值的1.1％、4.5％、13.0％。 20℃、4℃、-20℃保存時(shí)，腦組織、血液和尿液中普魯卡因含量分別在保存第2、2、2，2、4、8和32、48、64天顯著下降(P<0.05)；腦組織、血液和尿液在-20℃保存120天中普魯卡因含量分

10、別為初始值的1.0％、1.9％和35.6％。 20℃、4℃、-20℃保存時(shí)，腦組織、血液和尿液中布比卡因含量在保存第8、16、64，4、4、8和2、4、16天顯著下降(P<0.05)；腦組織、血液和尿液在-20℃保存120天中布比卡因濃度分別為初始值的54.5％、35.5％和33.2％。 結(jié)論: 1. 建立了腦組織、血液和尿液中測(cè)定利多卡因、普魯卡因、布比卡因的GC及GC/MS分析方法，可使藥物原體和代謝產(chǎn)物完全

11、分離，該法簡(jiǎn)便、靈敏、重現(xiàn)性好，適用于利多卡因、普魯卡因和布比卡因麻醉意外案例的快速鑒定。 2. 建立了利多卡因、普魯卡因和布比卡因在生物樣品中的分解動(dòng)力學(xué)研究模型，可應(yīng)用于其法醫(yī)毒理學(xué)研究。 3. 利多卡因、普魯卡因和布比卡因在各保存條件下均有分解，20℃保存時(shí)分解較快，其次為4℃，-20℃保存時(shí)分解較慢，因而麻醉意外死亡和中毒案件的法醫(yī)學(xué)鑒定中應(yīng)注意冷藏或冷凍保存檢材，并盡快檢驗(yàn)。 4. 利多卡因、普魯卡因、