β-乳香酸通過激活eNOS-NO-cGMP通路對血瘀證誘導(dǎo)大鼠血管內(nèi)皮損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的:觀察β-乳香酸(β-BA)對血瘀證誘導(dǎo)大鼠血管內(nèi)皮損傷的保護(hù)作用并進(jìn)一步通過細(xì)胞分子水平驗(yàn)證β-乳香酸對血瘀證誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用機(jī)制。
　　方法:將大鼠隨機(jī)分為4組:空白組(control)、模型組(model)、β-BA200mg/kg組、β-BA100 mg/kg組，每組8只，每12h給藥1次、連續(xù)給藥7次，第5次給藥后造模，除空白組大鼠外，給于皮下注射2次0.8 mg/kg的鹽酸腎上腺素，2次給藥間隔4h，中間

2、給予0～2℃的冰水刺激造成急性血瘀證模型。最后一次給藥30 min內(nèi)取血檢測凝血指標(biāo)、取頸動脈檢測一氧化氮(Nitric Oxide，NO)、環(huán)磷酸鳥苷(cyclic guanosine3’，5’-monophosphate,cGMP)濃度，觀察頸動脈的病理變化，取腸系膜動脈檢測血管舒張功能。通過培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(humanumbilical vein endothelial cells，HUVECs)進(jìn)行細(xì)胞水平的研究，細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的

3、模型采用養(yǎng)糖剝奪(oxygen and glucose deprivation，OGD)模型，分為空白組、OGD組、β-BA50μM組和β-BA25μM組，采用MTT法檢測細(xì)胞活性、一氧化氮熒光探針檢測NO的產(chǎn)生情況及免疫印記和免疫熒光測定內(nèi)皮型一氧化氮(endothelial nitric oxide synthase, eNOS)活性。
　　結(jié)果:(1)β-BA組和模型組相比可劑量依賴性地延長凝血時間(TT)、凝血酶原活動度(

4、APTT)、凝血酶時間(PT)(P＜0.01)，降低纖維蛋白原(FIB)含量(P＜0.01)。
　　(2)β-BA組大鼠腸系膜動脈的舒張作用較模型組增強(qiáng)，當(dāng)加入一氧化氮和酶抑制劑孵育后的動脈環(huán)β-BA的舒張作用受到抑制。
　　(3)HE染色顯示模型組大鼠頸動脈內(nèi)皮細(xì)胞受損，部分脫落，β-BA組頸動脈內(nèi)皮較完整。
　　(4)與模型組相比β-BA組頸動脈組織中NO及cGMP濃度增加，且呈劑量依賴性。
　　(5)細(xì)胞試

5、驗(yàn)中與OGD組相比β-BA組的NO熒光增強(qiáng)，免疫熒光和免疫印記顯示β-BA組細(xì)胞中p-eNOS表達(dá)增加，且呈劑量依賴性。
　　(6)當(dāng)敲出eNOS基因后β-BA組細(xì)胞活性較未敲出eNOS基因組活性降低。
　　結(jié)論:(1)β-乳香酸能夠濃度依賴性地增加OGD模型細(xì)胞和血瘀證大鼠動脈中NO和cGMP產(chǎn)生，顯著改變血瘀證大鼠凝血功能、增強(qiáng)腸系膜動脈的舒張作用、保護(hù)血管內(nèi)皮的完整性。
　　(2)β-乳香酸通過eNOS-NO-c