復(fù)雜生物體系中蛋白質(zhì)分離分析方法的建立.pdf

1、基于質(zhì)譜技術(shù)的蛋白質(zhì)組學(xué)已經(jīng)成為當(dāng)前生命科學(xué)領(lǐng)域的一個研究熱點。質(zhì)譜技術(shù)提供了一種快速、靈敏的鑒定蛋白質(zhì)混合物的方法。但在蛋白質(zhì)組學(xué)研究中，質(zhì)譜鑒定前多采用對蛋白質(zhì)混合物酶切，產(chǎn)生更復(fù)雜的多肽混合物的樣品制備方式，復(fù)雜程度過高的樣品導(dǎo)致蛋白質(zhì)鑒定結(jié)果的低覆蓋率和高假陽性率?；谝陨显?，本研究的目的是建立復(fù)雜生物體系蛋白質(zhì)分離方法，在蛋白質(zhì)水平上進(jìn)行蛋白質(zhì)的分離分析，以提高蛋白質(zhì)鑒定的可靠性，適應(yīng)蛋白質(zhì)組學(xué)研究發(fā)展的需要。 本

2、課題的主要工作是在蛋白水平上建立一種簡單、高效的蛋白質(zhì)分離方法，研究對象為血清蛋白譜。具體研究如下：1)通過對不同類型的反相色譜填料C4、R2、強陽離子交換(SCX)色譜填料和新型離子交換色譜填料分離血清蛋白所得色譜結(jié)果比較，確定新型離子交換色譜填料具有較高的分離效率；2)優(yōu)化流動相的流速、樣品進(jìn)樣量和微毛細(xì)管柱尺寸，獲得最佳分離條件；3)優(yōu)化梯度洗脫條件，確定分離血清蛋白樣品的最佳方法；4)評價分離方法的重現(xiàn)性；5)按照色譜分離峰與時

3、間相結(jié)合的辦法收集組分，隨機選取兩組分經(jīng)過LC-MS/MS的方法鑒定出可信度)90％的四種蛋白：Gap junction beta lprotein、Ras-32、Ras-10和Conserved hypotheticalprotein；6)應(yīng)用建立的色譜分離方法分離了同一胰腺癌患者術(shù)前術(shù)后血清，結(jié)果表明該色譜方法可以高效的分離蛋白質(zhì)混合物。 本實驗建立了簡單、高效的復(fù)雜生物體系中蛋白質(zhì)分離方法，它不僅為提高蛋白質(zhì)鑒定的可信度