染色體易位攜帶者植入前遺傳學診斷體系的建立與應(yīng)用.pdf

1、目的：(1)以單細胞細菌人工染色體一熒光原位雜交(bacterial artificial chromosome-Fluorescent in situ hybridisation，BAC-FISH)為核心技術(shù)，建立染色體易位攜帶者植入前遺傳學診斷(preimplantationgenetic diagnostic，PGD)體系。(2)將建立的染色體易位攜帶者PGD體系應(yīng)用于臨床。 方法：(1)從遺傳咨詢門診中篩選一例經(jīng)G顯帶證

2、實為染色體易位攜帶者(即病例1，核型為46，XY，t(1；12)(q32；q13))，有體外受精/單精子卵胞漿內(nèi)注射(in-vitro fertilization/intracytoplasmicsperm injection，IVF/ICSI)指征，且要求行PGD的患者，根據(jù)患者核型選擇合適的BAC克隆，自制BAC探針，用正常人及該攜帶者的外周血淋巴細胞、我室建株淋巴細胞行預實驗。然后，對染色體核型正常夫婦IVF/ICSI后發(fā)育不良的

3、卵裂球細胞行單細胞BAC-FISH，建立基于BAC-FISH技術(shù)的染色體易位攜帶者PGD體系。(2)用建立的診斷體系，對4例染色體易位攜帶者夫婦，分別行1個PGD周期，(病例1為男性攜帶者，46，XY，t(1；12)(q32；q13)；病例2為男性攜帶者，46，XY，t(7；13)(p10；q10)；病例3為女性攜帶者，46，XX，t(1；5)(p32；q35.1)；病例4為男性攜帶者，45，XY，der(13；14)(q10；q10)

4、，4例攜帶者的配偶染色體核型均正常)。 結(jié)果：(1)體系建立中，所選BAC探針在外周血淋巴細胞間期核的平均雜交效率為95.9％，特異性為100％。建株淋巴細胞固定中，35個淋巴細胞用吐溫-20/鹽酸(Tween-20/HCL，TH)法固定，34.3％(12/35)的細胞在固定中丟失，65.7％(23/35)的細胞見單核，0％(0/35)的細胞見2個核。98個淋巴細胞用吐溫-20/鹽酸+甲醇：冰醋酸(Tween.20/HCL+Me

5、thanol：Acetic acid，TH+MA)法固定，3.1％(3/98)的細胞在固定中丟失，94.9％(93/98)的細胞見單核，2％(2/98)的細胞見2個核。共獲得捐獻卵裂球細胞205個，205個用于固定，0％(0/205)的細胞在固定中丟失，47.4％(97/205)的細胞見單核，6.8％(14/205)的細胞見多核(≥2個核)，19.0％(39/205)的細胞見核碎片，26.8％(55/205)的細胞未見核。97個卵裂球細

6、胞用于雜交，雜交后93個見信號，雜交效率95.9％(93/97)。(2)4例染色體易位攜帶者PGD結(jié)果表明，病例1、病例2、病例4分別有1個、1個、4個胚胎未見異常，病例3的2個胚胎無法診斷。病例1、2、3、4分別移植1個、1個、2個、3個胚胎，其中病例1、2、3均未妊娠，病例4已獲臨床妊娠，目前正在妊娠中。 結(jié)論：(1)以單細胞BAC-FISH為核心技術(shù)建立了染色體易位攜帶者：PGD體系。(2)建立的染色體易位攜帶者PGD體系