DC-SIGN和DC-SIGNR作為一種新的標(biāo)記物在人類結(jié)腸癌患者中的表達(dá)及其臨床意義.pdf

1、背景:結(jié)直腸癌是全世界最常見的消化道惡性腫瘤之一，近20年來結(jié)腸癌的發(fā)病率及死亡率在世界上大多數(shù)國家都呈上升趨勢，大多數(shù)的結(jié)腸癌患者發(fā)現(xiàn)已是晚期，預(yù)后較差。目前對于結(jié)腸癌的篩查和診斷的方法都是侵襲性的，結(jié)腸鏡仍是其篩查診斷的金標(biāo)準(zhǔn)。近年來，糞便潛血試驗是結(jié)直腸癌篩查中使用最普遍的非侵入性檢查方法，但是，其靈敏度和特異度較低。如果簡單的血清檢測能夠應(yīng)用于它的早期診斷將有助于結(jié)腸癌的預(yù)防和預(yù)后，當(dāng)前臨床應(yīng)用廣泛的結(jié)腸腫瘤標(biāo)志物，如癌胚抗原(

2、CEA)、糖類抗原199(CA199)大大提高了結(jié)腸癌的診斷，降低死亡率和復(fù)發(fā)率，但它們的靈敏度和特異性不高。因此，它們作為結(jié)腸癌早期診斷的標(biāo)志物的作用是很有限的。
　　在腫瘤的發(fā)生發(fā)展的過程中，細(xì)胞癌變、浸潤和轉(zhuǎn)移都可能與細(xì)胞膜上糖蛋白和糖脂發(fā)生改變有關(guān)。凝集素是具有對糖分子專一識別和結(jié)合功能的糖蛋白或蛋白質(zhì)，在腫瘤研究中越來越受到重視，成為研究腫瘤發(fā)展及治療中不可缺少的分子。本實驗室已經(jīng)報道，LSECtin(liver and

3、 lymph node sinusoidal endothelial cellC-type lectin)在大腸癌肝轉(zhuǎn)移中起著重要的作用，并可能成為干預(yù)轉(zhuǎn)移形成的很有前途的新目標(biāo)。最近的研究表明，與前者同一家族的樹突細(xì)胞特異性細(xì)胞間粘附分子3結(jié)合的非整合素(Dendritic cell-specific intracellular adhesionmolecule-3-grabbing nonintegrin，DC-SIGN，CD209

4、)，作為一種凝集素，能與結(jié)腸癌細(xì)胞表面的癌胚抗原結(jié)合，參與了腫瘤的發(fā)生與發(fā)展。
　　最初由Geijtenbeek T B等研究DC細(xì)胞在人類免疫缺陷病毒(HIV)感染過程中的作用時，發(fā)現(xiàn)了DC-SIGN，其是DC膜表面的一種C型凝集素，可以和T細(xì)胞表面的細(xì)胞間黏附分子3(ICAM-3)相互作用，介導(dǎo)DC細(xì)胞與T細(xì)胞的原始黏附，后來研究發(fā)現(xiàn)DC-SIGN可在DC黏附遷移及炎癥反應(yīng)、激活初始T細(xì)胞并啟動免疫應(yīng)答以及病原體與腫瘤的免疫逃

5、逸等諸多方面發(fā)揮著重要作用。
　　DC-SIGN與其同系物DC-SIGNR(DC-SIGN-related protein，also known asL-SIGN，CD209L)，連同LSECtin和CD23作為一個C型凝集素的基因簇位于人類染色體19p13.3，DC-SIGN主要表達(dá)在于未成熟的DC和淋巴結(jié)內(nèi)成熟DC細(xì)胞膜上，而DC-SIGNR主要表達(dá)在肝臟、淋巴結(jié)等內(nèi)皮細(xì)胞表面。兩者作為一種Ⅱ型跨膜蛋白質(zhì)，在胞漿外區(qū)含有C型凝

6、集素特有的糖識別結(jié)構(gòu)域CRD（carbohydraterecognition domain），在Ca2+存在的條件下特異性的識別和結(jié)合許多病原體上的甘露糖和（或）巖藻糖的糖鏈，也可以和非唾液酸化的lewis糖結(jié)合。眾所周知，結(jié)腸癌細(xì)胞而不是正常結(jié)腸上皮細(xì)胞表面的CEA有高度的巖藻糖基化（lewis糖），且有報道顯示，在結(jié)腸癌中表達(dá)DC-SIGN的未成熟樹突狀細(xì)胞主要分布在腫瘤內(nèi)部位，能夠區(qū)分異常腫瘤細(xì)胞表面CEA并與其上的lewis糖結(jié)

7、合。雖然DC-SIGNR與DC-SIGN有77％的氨基酸序列相同，但目前還沒有關(guān)于DC-SIGNR與結(jié)腸癌關(guān)系的報道。
　　目的:1、檢測結(jié)腸癌患者血清中可溶性DC-SIGN(the suloble DC-SIGN，sDC-SIGN)和可溶性DC-SIGNR(the suloble DC-SIGNR，sDC-SIGNR)的表達(dá)水平，分析其與健康對照組的區(qū)別;2、比較結(jié)腸癌患者血清中sDC-SIGN和sDC-SIGNR表達(dá)水平根據(jù)T

8、NM分期和轉(zhuǎn)移情況分組時的區(qū)別，分析兩者在疾病變化時的意義;3、比較早期結(jié)腸癌患者與健康對照組血清中sDC-SIGN和sDC-SIGNR的水平，分析其在結(jié)腸癌早期診斷中的價值;4、與便潛血試驗進(jìn)行比較，分析血清中sDC-SIGN和sDC-SIGNR的水平在結(jié)腸癌篩查中的意義;5、分析結(jié)腸癌患者血清中sDC-SIGN和sDC-SIGNR的水平與患者生存期的關(guān)系，評價其對結(jié)腸癌預(yù)后的影響;6、監(jiān)測結(jié)腸癌患者在病情發(fā)展過程中的變化情況，分析其

9、在個體化病情判斷中的作用;7檢測結(jié)腸癌患者組織中DC-SIGN和DC-SIGNR的表達(dá)情況，分析各組的差別;8、檢測死亡患者組織中的DC-SIGN中的表達(dá)情況與患者生存期的關(guān)系，分析其在結(jié)腸癌預(yù)后中的價值。
　　方法:1、應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)方法對182例結(jié)腸癌患者和101位健康志愿者血清中sDC-SIGN和sDC-SIGNR的水平進(jìn)行檢測;2、應(yīng)用電化學(xué)發(fā)光的方法檢測血清中CEA、CA199的表達(dá)水平;3、應(yīng)用免疫

10、膠體金的方法檢測結(jié)腸癌患者糞便中的潛血情況;4、應(yīng)用免疫組織化學(xué)的方法評估DC-SIGN和DC-SIGNR在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)，并應(yīng)用Image Pro Plu圖像分析系統(tǒng)對DC-SIGN的免疫組織組化結(jié)果進(jìn)行了半定量分析。
　　結(jié)果:1、結(jié)腸癌患者血清中有sDC-SIGN和sDC-SIGNR的表達(dá)，且結(jié)腸癌患者sDC-SIGN水平明顯低于健康對照組，sDC-SIGNR的水平卻明顯高于健康對照組;2、不同TNM分期的結(jié)腸癌患者Ⅲ期

11、患者血清中的sDC-SIGN水平最低（淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者表達(dá)水平低）;然而，血清sDC-SIGNR的水平隨分期的增加而升高;3、血清中sDC-SIGN和sDC-SIGNR的表達(dá)水平與性別、年齡、腫瘤細(xì)胞分化程度以及血清腫瘤標(biāo)記物CEA、CA199等指標(biāo)無明顯相關(guān)性;4、對于結(jié)腸癌的診斷，兩者的最佳濃度分別為sDC-SIGN＜2.226μg/ml、 sDC-SIGNR＞227.2ng/ml，前者具有高敏感性，后者具有高特異性，兩者聯(lián)合診斷時

12、敏感性和特異性都大于95％;5、早期（Ⅰ/Ⅱ期）結(jié)腸癌患者組sDC-SIGN和sDC-SIGNR的表達(dá)水平與健康對照組比較有明顯差異，P＜0.05，在結(jié)腸癌的早期診斷中兩者優(yōu)于CEA、CA199;6、血清sDC-SIGN＞2.226μg/ml時對結(jié)腸癌進(jìn)行篩查真陽性率96.6％，比便潛血檢測(58.6％)高，且假陰性率低;7、血清sDC-SIGN＞2.226μg/ml的結(jié)腸癌患者與sDC-SIGN＜2.226μg/ml的患者相比生存期較

13、長;8、11例結(jié)腸癌患者的連續(xù)監(jiān)測結(jié)果顯示血清sDC-SIGN水平受治療影響較小，而在發(fā)生轉(zhuǎn)移時變化較大;9、DC-SIGNR在正常結(jié)腸組織和癌巢中表達(dá)陰性，只在癌巢中間表達(dá)呈弱陽性;10、DC-SIGN正常結(jié)腸組織是微弱表達(dá)，在結(jié)腸癌組織呈強(qiáng)表達(dá);DC-SIGN在組織中的表達(dá)水平與血清sDC-SIGN水平呈負(fù)相關(guān)，r=-0.4643，而與血清中CEA的水平無相關(guān)性;11、死亡患者的結(jié)腸癌組織中DC-SIGN表達(dá)的平均密度＞0.0012

14、19（正常結(jié)腸組織表達(dá)的95％可信區(qū)間）的患者的生存時間明顯高于其他患者。
　　結(jié)論:1、首次在血清中檢測到sDC-SIGN和sDC-SIGNR的表達(dá)，且隨腫瘤的分期或轉(zhuǎn)移情況不同而呈不同的表達(dá)水平;2、sDC-SIGN和sDC-SIGNR可作為結(jié)腸癌的早期診斷的生物標(biāo)記物，sDC-SIGN具有高敏感性，而sDC-SIGNR具有高特異性，兩者聯(lián)合診斷具有較高的診斷價值;3、血清sDC-SIGN水平作為結(jié)腸癌高危人群篩查指標(biāo)優(yōu)于便潛

15、血試驗;4、結(jié)腸癌患者血清sDC-SIGN水平高表達(dá)者與低表達(dá)者相比有較長的生存期，可以為醫(yī)生評估患者的預(yù)后提供幫助;5、DC-SIGNR在結(jié)腸癌組織中不表達(dá)，DC-SIGN在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)隨病情進(jìn)展而升高，且其的表達(dá)水平影響患者的生存時間，與疾病的預(yù)后相關(guān);6、DC-SIGN和DC-SIGNR雖然為同系物，但他們在結(jié)腸癌的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后中的作用卻不相同。
　　總之，DC-SIGN和DC-SIGNR，尤其是DC-SIGN，可