低分子肝素時(shí)段干預(yù)高脂血癥大鼠急性壞死性胰腺炎PAF、ET-1-NO、TXA2-PGI2的研究.pdf

1、目的：研究不同時(shí)段 LMWH干預(yù)對(duì)高脂血癥大鼠急性壞死性胰腺炎血 PAF、ET-1/NO、TXA2/PGI2的影響，統(tǒng)計(jì)大鼠72h生存率，為臨床LMWH治療高脂血癥性重癥急性胰腺炎（hyperlipidemia severe acute pancreatitis，HL-SAP）的最佳時(shí)機(jī)選擇提供理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法：健康雄性SD大鼠160只，隨機(jī)分成A組（實(shí)驗(yàn)組），n=64；B組（對(duì)照組）,n=64；C組（假手術(shù)組）,n

2、=32。三組大鼠高脂飼料喂養(yǎng)四周后，A、B兩組各隨機(jī)分為0h（n=16）、6h（n=16）、12h（n=16）、18h（n=16）四個(gè)時(shí)段組。A、B兩組大鼠均行5％牛磺膽酸鈉(0.1ml/100g)逆胰膽管注射法建立ANP模型，C組大鼠開腹僅翻動(dòng)十二指腸。A0h、A6h、A12h、A18h組大鼠于ANP成模后分別皮下注射（subcutaneous injection,SI）LMWH0.2ml/100g/次(100IU/kg/次)，各時(shí)段

3、均間隔6h重復(fù)注射一次，至成模后24h。B0h、B6h、B12h、B18h組大鼠ANP成模后采用同法分別皮下注射等量生理鹽水(normal saline,NS)。A、B、C三組大鼠均在ANP建模后24h再隨機(jī)等數(shù)分成兩部分，一部分半數(shù)量大鼠開腹觀察腹水、皂化斑以及胰腺大體改變，取門靜脈血檢測(cè) PAF、ET-1、NO、TXB2（TXA2）、6-Keto-PGF1α（PGI2）、AMY以及血Ca2+濃度，取胰腺組織HE染色病理學(xué)檢查并進(jìn)行胰

4、腺組織病理學(xué)評(píng)分，透射電鏡觀察胰腺微血管血栓；另一部分半數(shù)量大鼠繼續(xù)皮下注射NS觀察72h生存時(shí)間。
　　結(jié)果：
　?。?）甘油三酯（TG）：高脂飼料喂養(yǎng)四周后，進(jìn)行喂養(yǎng)前后比較，A、B、C三組大鼠TG濃度分別為1.590±0.321mmol/L、1.603±0.257mmol/L、1.597±0.238mmol/L，均高于喂養(yǎng)前A組0.492±0.051mmol/L(P<0.01)、B組0.501±0.094mmol/L(

5、P<0.01)及C組0.526±0.051mmol/L(P<0.01)。
　?。?）腹腔大體情況：A、B組大鼠ANP成模后24h開腹，B組大鼠腹腔內(nèi)可見血性腹水和皂化斑形成，胰腺片狀出血、壞死；A組大鼠腹腔內(nèi)可見淡黃色腹水、點(diǎn)狀皂化斑，胰腺點(diǎn)狀出血壞死；SO組未見上述改變。
　?。?）血Ca2+、AMY：A組大鼠各時(shí)段組血Ca2+濃度均高于B組大鼠相應(yīng)各時(shí)段組血Ca2+濃度（P<0.01）；A組大鼠各時(shí)段組血AMY濃度均低于

6、B組大鼠相應(yīng)各時(shí)段組血AMY濃度（P<0.05）。
　?。?）血 PAF：A組大鼠各時(shí)段組血PAF濃度均低于B組相應(yīng)各時(shí)段組血PAF濃度（P<0.01）；A0h（5.5596±0.5738 ng/ml）、A6h（5.3424±0.1497ng/ml）血PAF濃度均低于A12h（6.3309±0.3731ng/ml）（P<0.01）、A18h（6.4671±0.3153 ng/ml）（P<0.01）時(shí)段組血PAF濃度；B組大鼠時(shí)段組

7、內(nèi)PAF濃度比較無顯著性差異（P>0.05）。
　?。?）血ET-1、NO及ET-1/NO（E/N）：A組各時(shí)段組大鼠血ET-1、NO濃度及E/N比值均低于B組相應(yīng)各時(shí)段組（P<0.01）；A0h（105.5882±2.6904ng/ml）、A6h（106.8563±1.9186ng/ml）時(shí)段組ET-1濃度均低于A12h（133.1583±1.7929 ng/ml）（P<0.01）、A18h（134.9255±0.5946ng/

8、ml）（P<0.01）時(shí)段組ET-1濃度；A0h（3.3245±0.1963）、A6h（3.2851±0.0755）時(shí)段組E/N比值均低于A12h（3.7268±0.0828）（P<0.01）、A18h（3.8107±0.0677）（P<0.01）時(shí)段組E/N比值；B組大鼠時(shí)段組內(nèi)NO濃度比較無顯著性差異（P>0.05）。
　　（6）血TXB2、6-Keto-PGF1α及TXB2/6-Keto-P GF1α（T/P）：A組大鼠各時(shí)

9、段組血TXB2、6-Keto-PGF1α濃度及T/P比值均低于B組相應(yīng)各時(shí)段組（P<0.01）；A0h（82.735±2.058 pg/ml）、A6h（87.239±2.971pg/ml）時(shí)段組TXB2濃度均低于A12h（113.750±5.076pg/ml）（P<0.01）、A18h（112.392±4.526pg/ml）（P<0.01）時(shí)段組TXB2濃度；A0h（1.213±0.036）、A6h（1.326±0.041）時(shí)段組T/P

10、比值均低于A12h（1.848±0.089）（P<0.01）、A18h（1.828±0.091）（P<0.01）時(shí)段組T/P比值；B組大鼠時(shí)段組內(nèi)6-Keto-PGF1α濃度比較無顯著性差異（P>0.05）。
　?。?）HE染色胰腺組織病理學(xué)檢查及病理學(xué)評(píng)分：A組大鼠可見胰腺組織水腫，點(diǎn)狀出血及壞死，少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；B組大鼠可見胰腺組織水腫、片狀出血及壞死，大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；SO組無上述改變。A組大鼠各時(shí)段組胰腺組織病理學(xué)評(píng)分均

11、低于B組大鼠相應(yīng)各時(shí)段組（P<0.01）；A0h(5.375±0.517)、A6h（5.625±0.518）時(shí)段組胰腺組織病理學(xué)評(píng)分均低于A12h（8.625±0.518）（P<0.01）、A18h（8.375±0.517）（P<0.01）時(shí)段組病理學(xué)評(píng)分；A、B、C三組大鼠胰腺組織病理學(xué)評(píng)分與血PAF濃度、E/N比值、T/P比值的相關(guān)系數(shù)r分別為0.891、0.841和0.868，均呈正相關(guān)（P<0.01）。
　　（8）透射電鏡

12、觀察：A組大鼠胰腺腺泡細(xì)胞空泡化少見，點(diǎn)狀壞死，微血管血栓少見；B組大鼠可見胰腺腺泡細(xì)胞空泡化、壞死，胰腺微血管內(nèi)皮細(xì)胞連接不完整，微血管血栓多見；SO組未見上述改變。
　　（9）生存時(shí)間：A組大鼠48h生存率62.50%，、72h生存率43.75%，高于B組大鼠48h（34.38%）（P<0.05）及72h（15.63%）（P<0.05）生存率，但低于SO組48h(100%)（P<0.01）及72h（100%）（P<0.01）生

13、存率。
　　結(jié)論：
　?。?）實(shí)驗(yàn)組大鼠血PAF、ET-1、NO、TXA2以及PGI2濃度降低，胰腺微血管血栓減少，胰腺組織病理學(xué)評(píng)分降低，提示LMWH可改善HL大鼠ANP胰腺微循環(huán)。
　?。?）實(shí)驗(yàn)組大鼠各時(shí)段中，0h、6h時(shí)段組LMWH干預(yù)后PAF、ET-1、TXA2濃度及胰腺組織病理學(xué)評(píng)分均低于12h、18h時(shí)段組，提示LMWH早期干預(yù)較延期干預(yù)效果更好。
　?。?）實(shí)驗(yàn)組大鼠48h、72h生存率均高于對(duì)照