熒光量子點(diǎn)提高多輪基因擴(kuò)增效率的研究及機(jī)理探討.pdf

1、本課題通過將納米材料量子點(diǎn)與多輪基因擴(kuò)增結(jié)合，以此來達(dá)到提高多輪擴(kuò)增輪數(shù)，以及擴(kuò)增特異性的效果。量子點(diǎn)在高保真的Pfu DNA聚合酶所催化的PCR體系中下可以產(chǎn)生明顯的熱啟動(dòng)效果，并且在50℃溫浴1h的情況下依然能產(chǎn)生清晰的目的條帶。在本課題中首先選用3種不同來源的模板以及不同GC含量的引物進(jìn)行基于量子點(diǎn)的多輪基因擴(kuò)增，探究擴(kuò)增特異性的影響因素。在以海洋污損生物藤壺M8模板的多輪擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)中，量子點(diǎn)在實(shí)驗(yàn)中的使用使得擴(kuò)增輪數(shù)從3輪有效擴(kuò)增

2、提高到了8輪，通過對(duì)比相同擴(kuò)增條件下的常規(guī)多輪基因擴(kuò)增以及基于納米金的多輪基因擴(kuò)增方法的擴(kuò)增效果，進(jìn)一步驗(yàn)證了量子點(diǎn)對(duì)多輪基因擴(kuò)增特異性的提高具有顯著的效果。通過對(duì)比量子點(diǎn)作用下的不同模板，低濃度模板的多輪基因擴(kuò)增效果，以及不同表面修飾的量子點(diǎn)對(duì)多輪基因擴(kuò)增效果的影響，量子點(diǎn)均表現(xiàn)出了穩(wěn)定且優(yōu)異的增效作用，在這基礎(chǔ)上通過將擴(kuò)增產(chǎn)物測(cè)序結(jié)果比對(duì)，顯示出了量子點(diǎn)所作用的多輪基因擴(kuò)增具有高度的忠實(shí)性，這對(duì)能否作為實(shí)際應(yīng)用具有重要的意義。

3、>　　量子點(diǎn)在由高保真Pfu DNA聚合酶所催化的多輪基因擴(kuò)增中能產(chǎn)生明顯的熱啟動(dòng)效果，而在普通的Taq聚合酶催化的擴(kuò)增體系中卻沒有顯著的差別，因此，量子點(diǎn)與Pfu DNA聚合酶之間的相互作用作為主要的機(jī)理研究對(duì)象。利用瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)初步檢測(cè)發(fā)現(xiàn)PCR體系中的各個(gè)組分均能夠與量子點(diǎn)產(chǎn)生一定的作用，但量子點(diǎn)與Pfu DNA聚合酶的之間的影響最大，之后采用紫外可見分光光譜法以及傅里葉紅外光譜法進(jìn)行深入研究分析更加證實(shí)了量子點(diǎn)與Pfu D