聯(lián)合應用生長抑素和前列腺素E1對大鼠極限肝切除術后急性肝損傷的保護作用及其機制的研究.pdf

1、目的：
　　 探討聯(lián)合應用生長抑素和前列腺素E1對大鼠極限肝切除術后急性肝損傷的保護作用及其機制的研究。
　　 材料和方法
　　 采用大鼠90％肝切除動物模型，將64只大鼠隨機分為4組，用于肝大部切除術后肝功能損害的研究:單純肝大部切除術組，即對照組（Control Group，C組）16只，生長抑素治療組(Somatostatin Group，S組)16只，前列腺素E1治療組（Prostaglandin E1

2、Group，P組）16只和聯(lián)合用藥治療組（Mixed Group， M組）16只。四組大鼠均分別在肝切除術后10分鐘、6小時、12小時和24小時這4個時間點進行觀察，共分為16個亞組，分別為:C0、C6、C12、C24，S0、S6、S12、S24，P0、P6、P12、P24，M0、M6、M12、M24。每個亞組4只大鼠，于各時點進行標本采集。血清標本進行丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)、總

3、膽紅素(TB)、白蛋白(ALB)測定。檢測相應時間點的門靜脈壓力值。檢測肝組織濕重并計算肝重體重比。肝組織HE染色觀察光鏡下形態(tài)學改變，并用TUNEL法檢測肝細胞凋亡指數(shù)。血清標本用于檢測細胞因子(TNF-α、IL-6)以及抗氧化酶(SOD、GSH)的水平。肝組織冷凍標本用于檢測細胞因子（TNF-α、IL-6）、抗氧化酶(SOD、GSH)、凋亡相關蛋白(Bcl-2、Bax、Caspase3、HSP70)以及內(nèi)質網(wǎng)應激相關調節(jié)蛋白(CGR

4、P78、PERK、ATF6、CHOP)的表達。另外選取40只大鼠隨機分為相應的4組，觀察術后生存時間，進行術后生存時間的統(tǒng)計和分析。
　　 結果：
　　 1、肝功能檢測:肝切除術后24h，藥物處理組（S組、P組和M組）血清ALT、AST、ALP和TB水平與單純肝切除對照組（C組）比較均明顯下調(P＜0.05)，而血清ALB水平各組間無顯著性差異。
　　 2、肝重體重比測定:肝切除術后24h，聯(lián)合用藥組（M組）肝重

5、體重比與單純肝切除對照組（C組）和生長抑素組（S組）比較略有增加(P＜0.05，P＜0.05)。
　　 3、光鏡下病理組織形態(tài)學檢查:藥物處理組（S組、P組和M組）與單純肝切除對照組（C組）比較，肝細胞腫脹變性壞死及空泡樣變性、肝小葉結構排列紊亂、匯管區(qū)炎癥等肝細胞損害程度均有所減輕，其中以聯(lián)合用藥組（M組）減輕最明顯。
　　 4、生存時間分析:生長抑素組（S組）和前列腺素E1組（P組）生存時間較單純肝切除對照組（C組）

6、延長(P＜0.05)，而聯(lián)合用藥組（M組）生存時間較C組明顯延長(P＜0.001)。
　　 5、門靜脈壓力值測定:肝切除術后10min和6h，藥物處理組（S組、P組和M組）門靜脈壓力值與單純肝切除對照組（C組）比較均明顯下調(P＜0.01);肝切除術后12h，生長抑素組（S組）和聯(lián)合用藥組（M組）門靜脈壓力值與C組比較均明顯下調(P＜0.05);肝切除術后24h，C組門靜脈壓力值仍然高于基礎門靜脈壓力值，但S組、P組和M組門靜脈

7、壓力值與基礎門靜脈壓力值比較均已無顯著性差異。
　　 6、血清和肝組織腫瘤壞死因子--α(TNF-α)和白細胞介素-6(IL-6)水平:
　　 (1)血清ELISA法檢測:肝切除術后24h與術后10min、6h及12h比較，各組血清TNF-α水平均明顯升高。肝切除術后24h，藥物處理組（S組、P組和M組）血清TNF-α水平與單純肝切除對照組（C組）比較均明顯下調(P＜0.001)，并且前列腺素E1組（P組）和聯(lián)合用藥組（

8、M組）血清TNF-α水平分別低于生長抑素組（S組）(P＜0.001，P＜0.01)。肝切除術后24h與術后10min、6h及12h比較，各組血清IL-6水平均明顯升高。肝切除術后24h，S組、P組和M組血清IL-6水平與C組比較均明顯下調(P＜0.001)。(2)肝組織Western blot法檢測:肝切除術后24h與術后10min比較，C組肝組織TNF-α水平明顯升高。肝切除術后24h，S組、P組和M組肝組織TNF-α水平與C組比較均

9、明顯下調，其中M組肝組織TNF-α水平又低于S組和p組(P＜0.01，P＜0.01)。肝切除術后24h與術后10min比較，C組肝組織IL-6水平亦明顯升高。肝切除術后24h，S組、P組和M組肝組織IL-6水平與C組比較均明顯下調(P＜0.01)，其中M組肝組織IL-6水平又低于S組和P組(P＜0.01，P＜0.01)。
　　 7、血清和肝組織抗氧化酶SOD、GSH水平:隨著術后時間的延長，各組血清和肝組織SOD和GSH的水平逐

10、漸升高恢復;與單純肝切除對照組（C組）比較，藥物處理組（S組、P組、M組）可明顯升高血清和肝組織SOD和GSH的水平(P＜0.05)。
　　 8、TUNEL法檢測肝細胞凋亡指數(shù):隨著術后時間的延長，各組肝細胞凋亡指數(shù)（Apoptotic Index，AI）逐漸升高。肝切除術后12h，藥物處理組（S組、P組和M組）AI值與單純肝切除對照組（C組）比較均明顯下調(P＜0.05)。肝切除術后24h，藥物處理組(S組、P組和M組)AI值

11、與C組比較均明顯下調(P＜0.001);與生長抑素組（S組）和前列腺素E1組（P組）比較，聯(lián)合用藥組（M組）AI值明顯下調(P＜0.001，P＜0.05)。
　　 9、Western blot法檢測Bcl-2、Bax、Caspase3和HSP70蛋白表達水平:肝切除術后24h與術后10min比較，單純肝切除對照組（C組）Bcl-2和HSP70蛋白表達水平明顯降低。肝切除術后24h，藥物處理組（S組、P組和M組）Bcl-2和HSP

12、70蛋白表達水平與C組比較均上調(P＜0.01)，其中以聯(lián)合用藥組（M組）上調最明顯(P＜0.01)。肝切除術后24h與術后10min比較，C組Bax和Caspase3蛋白表達水平明顯升高;而肝切除術后24h，藥物處理組（S組、P組和M組）Bax和Caspase3蛋白表達水平與C組比較均下調(P＜0.01)，其中以M組下調最明顯(P＜0.01)。
　　 10、Western blot法檢測GRP78、PERK、ATF6和CHOP

13、蛋白表達水平:肝切除術后24h與術后10min比較，單純肝切除對照組（C組）GRP78蛋白表達水平明顯降低;而肝切除術后24h，藥物處理組（S組、P組和M組）GRP78蛋白表達水平與C組比較表達上調(P＜0.01)，其中以聯(lián)合用藥組（M組）上調最明顯(P＜0.01)。肝切除術后24h與術后10rmin比較，C組PERK、ATF6和CHOP蛋白表達水平均明顯升高;而肝切除術后24h，藥物處理組（S組、P組和M組）PERK、ATF6和CHO

14、P蛋白表達水平與C組比較均下調(P＜0.01)，其中以M組下調最明顯(P＜0.01)。
　　 結論：
　　 1、聯(lián)合應用生長抑素和前列腺素E1對大鼠極限肝切除術后急性肝損傷具有明顯的保護作用，且對肝切除術后早期的肝再生有一定的促進作用。
　　 2、聯(lián)合應用生長抑素和前列腺素E1能有效延長大鼠極限肝切除術后的生存時間，改善預后。
　　 3、聯(lián)合應用生長抑素和前列腺素E1可以減輕大鼠極限肝切除術后早期肝損傷的

15、程度，其作用機制可能是通過降低肝切除術后過高的門靜脈壓力，降低TNF-α、IL-6等炎癥細胞因子的表達，增強SOD、GSH等抗氧化物的表達，有效抑制過度炎癥反應，從而減輕對殘肝組織的損傷，保護肝功能。
　　 4、聯(lián)合應用生長抑素和前列腺素E1可以減輕大鼠極限肝切除術后早期出現(xiàn)的內(nèi)質網(wǎng)應激狀態(tài)，上調GRP78、HSP70和Bcl-2的表達，抑制PERK、ATF6、CHOP、Bax和Caspase3的表達，減輕繼發(fā)的肝細胞凋亡，緩解