硒對雞成肌細(xì)胞分化及骨骼肌炎癥基因表達(dá)影響的研究.pdf

1、硒作為人和動物必需的微量元素，在肌肉的新陳代謝過程中起著重要的作用。肌肉是因缺硒受損的主要組織，硒缺乏能引起包括人類的多種動物骨骼肌和心肌纖維改變，從而導(dǎo)致以心肌和骨骼肌出現(xiàn)鈣化、變性、血管損壞及出血等特征的疾病。硒在生物體內(nèi)發(fā)揮生物學(xué)功能主要是通過硒蛋白發(fā)揮。硒蛋白W(Selenoprotein W，SelW)是硒蛋白家族中的重要成員，在骨骼肌和心肌中均高表達(dá)，并且對維持正常骨骼肌生理功能有重要作用。目前對哺乳動物SelW的研究已有相

2、關(guān)報道，但對禽類SelW的研究，尤其是對與SelW相關(guān)的缺硒性肌病的研究甚少，并且對缺硒性肌病過程中的基因表達(dá)調(diào)控與發(fā)病機(jī)理的研究還是空白。本研究在建立缺硒雞模型和原代培養(yǎng)成肌細(xì)胞的基礎(chǔ)上，應(yīng)用形態(tài)學(xué)觀察、實時熒光定量PCR技術(shù)等，檢測了培養(yǎng)基中添加不同水平硒（10-9、10-8、10-7、10-6、10-5M）添加后12、24、48和72 h雞骨骼肌成肌細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化、SelW和分化因子(Myf-5、Myogenin、MRF4) m

3、RNA表達(dá)，并進(jìn)行了相關(guān)性分析;分別對15、25、35、45和55日齡雛雞的翅肌、胸肌及腿肌的SelW及炎癥基因(NF-κB、TNF-α、iNOS、COX-2、PTGES)的mRNA表達(dá)量變化及相關(guān)性進(jìn)行分析，結(jié)果表明:
　　 1.通過對原代培養(yǎng)雞骨骼肌成肌細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征變化的觀察，表明培養(yǎng)基中添加適量的硒濃度(10-7 M)能促進(jìn)骨骼肌細(xì)胞分化進(jìn)程，而過高的硒濃度10-5M）會顯著抑制細(xì)胞分化，降低細(xì)胞活性。證明硒對雞成肌細(xì)胞

4、分化有重要作用，而過高的硒濃度添加會產(chǎn)生細(xì)胞毒性作用，抑制雞成肌細(xì)胞分化。
　　 2.雞胚成肌細(xì)胞中添加10-7M濃度硒時SelW mRNA表達(dá)量最高，即10-7M硒濃度是雞胚成肌細(xì)胞SelW mRNA表達(dá)最佳硒添加濃度。培養(yǎng)基中硒濃度為10-5M時的雞成肌細(xì)胞SelW mRNA表達(dá)有抑制作用。
　　 3.隨培養(yǎng)基中硒濃的升高，三種調(diào)節(jié)因子Myf-5、Myogenin及MRF4 mRNA水平呈先升高再降低的變化趨勢，在1

5、0-7和10-8M硒濃度時出現(xiàn)表達(dá)量的最高峰值，然而硒濃度為過10-5 M時成肌調(diào)節(jié)因子的mRNA表達(dá)量最低，這與形態(tài)學(xué)分析結(jié)果一致，提示適量硒添加促進(jìn)雞骨骼肌成肌細(xì)胞分化進(jìn)程。Myf-5、Myogenin、MRF4與SelW mRNA均呈顯著正相關(guān)，推測SelW可能在成肌細(xì)胞分化進(jìn)程中發(fā)揮一定作用。
　　 4.低硒飼料能降低不同日齡雞胸肌、翅肌、腿肌中SelW mRNA的表達(dá)，尤其在低硒組腿肌中其表達(dá)量顯著降低。