多巴胺D2受體參與服期酒精暴露抑制新生大鼠節(jié)律性基本呼吸放電.pdf

1、背景：
　　長期過量飲酒對人體造成多器官、復(fù)合性嚴(yán)重危害，如心肌病變、造血功能抑制、消化系統(tǒng)潰瘍和腫瘤，更為嚴(yán)重的對神經(jīng)系統(tǒng)和生殖系統(tǒng)造成不可逆的損傷。孕齡婦女?dāng)z入酒精除對自身產(chǎn)生損害外還會對腹中胎兒產(chǎn)生嚴(yán)重、不可挽回的損傷。研究發(fā)現(xiàn)孕期攝入酒精降低子代低氧條件下攝取氧的能力;大鼠孕期攝入酒精降低新生大鼠延髓離體腦片呼吸節(jié)律性放電。這樣的實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)孕期酒精暴露抑制由各級呼吸中樞的共同參與調(diào)節(jié)的動物整體水平上的呼吸功能，產(chǎn)生基本呼

2、吸節(jié)律性放電的延髓呼吸中樞也受到了抑制。基本節(jié)律性呼吸起源于延髓呼吸中樞，前包欽格復(fù)合體(pre-B(o)tzinger complex，pre-B(o)tC)位于延髓腹外側(cè)區(qū)，是延髓基本節(jié)律性呼吸產(chǎn)生的關(guān)鍵部位。多巴胺是哺乳動物體內(nèi)廣泛存在的兒茶酚胺類神經(jīng)遞質(zhì)，調(diào)節(jié)著多種生理活動，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)多巴胺通過多巴胺受體參與情緒、運(yùn)動、攝食、饑餓、內(nèi)分泌等生理活動。現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)延髓神經(jīng)元細(xì)胞膜上存在多巴胺D2受體，但該受體是否參與孕期攝入酒精

3、對新生子代延髓呼吸中樞的抑制作用的研究尚未見報(bào)道，因此我們設(shè)計(jì)本實(shí)驗(yàn)，利用神經(jīng)電生理和分子生物學(xué)的實(shí)驗(yàn)方法研究多巴胺受體2是否參與該抑制作用及其可能機(jī)制。
　　目的：
　　研究孕期酒精暴露對新生大鼠延髓呼吸中樞節(jié)律性基本呼吸放電(rhythmicrespiratory discharge activities，RRDA)的作用和多巴胺D2受體在其中的作用。
　　方法：
　　對成年健康Sprague-Dawley大

4、鼠進(jìn)行孕期酒精暴露，自合籠前30d至實(shí)驗(yàn)時(shí)飼喂大鼠自主飲用且只飲用8％酒精水溶液;對照大鼠常規(guī)飼養(yǎng)。本實(shí)驗(yàn)使兩組用2d新生大鼠，雌雄不拘。
　　1.RRDA記錄:制作2d新生大鼠延髓離體腦片，使用吸附電極在腦片腹側(cè)面吸附舌下神經(jīng)根，舌下神經(jīng)根傳出的電活動即為反映了延髓呼吸功能的節(jié)律性基本呼吸放電。在2組新生大鼠腦片灌流液中加入多巴胺受體2特異性激動劑Quinpirole和特異性拮抗劑Raclopride，觀察Quinpirole和

5、Raclopride對兩組RRDA的作用差異，以明確孕期酒精暴露是否改變多巴胺2受體對新生大鼠延髓離體腦片節(jié)律性基本呼吸放電作用效果。
　　2.將2d新生小鼠延髓離體腦片pre-B(o)tC區(qū)切下，采用Western Blot檢驗(yàn)多巴胺D2受體在pre-B(o)tC區(qū)神經(jīng)元上的表達(dá)，研究孕期酒精暴露對受體表達(dá)的作用。
　　3.將2d新生小鼠延髓離體腦片pre-B(o)tC區(qū)切下，采用qRT-PCR-技術(shù)檢測多巴胺D2受體mR

6、NA在延髓呼吸中樞pre-B(o)tC區(qū)神經(jīng)元上的表達(dá)，研究孕期酒精暴露對受體mRNA表達(dá)的作用。
　　結(jié)果：
　　1.對照組和酒精暴露組新生大鼠延髓離體腦片呼吸節(jié)律性放電在60min內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)改變，實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ统闪?。多巴胺D2受體激動劑Quinpirole抑制對照組和酒精暴露組腦片呼吸節(jié)律性放電，對對照組的抑制效果強(qiáng)于實(shí)驗(yàn)組;多巴胺D2受體拮抗劑Raclopride對兩組新生大鼠延髓離體腦片呼吸節(jié)律性放電都有興奮作

7、用，酒精暴露組放電變化程度低于對照組。
　　2.Western Blot實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，孕期酒精暴露降低新生大鼠延髓呼吸中樞pre-B(o)tC區(qū)神經(jīng)元多巴胺D2受體表達(dá)水平。
　　3.qRT-PCR實(shí)驗(yàn)顯示，與對照組相比，孕期酒精暴露降低新生大鼠延髓呼吸中樞pre-B(o)tC區(qū)神經(jīng)元多巴胺D2受體mRNA表達(dá)水平。
　　結(jié)論：
　　1.孕期酒精暴露抑制新生大鼠延髓腦片節(jié)律性基本呼吸放電，降低多巴胺D2受體對腦片節(jié)律